Notch信号通路通过抑制Eph通路调控骨肉瘤干细胞样特性

摘要：

目的 研究Notch信号通路维持骨肉瘤干细胞样特性的作用及其机制.方法 体外细胞实验中,取对数生长期的人骨肉瘤细胞MG63细胞系,利用慢病毒技术转导NICD1、Numb-shRNA上调Notch信号通路活性,通过肿瘤成球实验,流式细胞术检测细胞表面标记物Stro-1、CD117,Western blot和qRT-PCR检测干细胞相关基因Sox2和Oct4,观察Notch信号通路对骨肉瘤干细胞样特性的影响.在动物实验中,根据注射成瘤细胞不同,将裸鼠随机分NICD1过表达组、DAPT抑制剂组和对照组.连续观察8周,通过记录每周肿瘤的体积和重量,比较各组成瘤后体积重量变化,观察Notch信号通路对动物成瘤的影响.进一步探索Notch信号通路调控Eph信号通路的体外细胞实验中,利用Western blot检测Eph通路相关蛋白EphB,p-EphB评价Notch信号通路对于Eph通路的调控作用.在体外实验MG63骨肉瘤细胞培养基中添加具有活性的ephrinB1后,利用Western blot、肿瘤成球率、Sox2、Oct4表达量变化,观察Eph通路激活后对肿瘤细胞干性的影响.结果 体外细胞实验中NICD1、Numb-shRNA成功上调Notch信号通路活性,Notch信号通路激活的骨肉瘤体外肿瘤成球率上调、流式细胞检测Stro-1/CD117双阳性比率增高,干细胞相关基因Sox2、Oct4表达量上调.动物实验发现Notch信号通路激活可促进体内成瘤,而抑制Notch信号通路会抑制体内成瘤.将DAPT处理后的骨肉瘤组织做原代培养,细胞成球显著降低.探索Notch信号通路调控Eph信号通路的体外细胞实验中,Western blot结果显示Notch通路激活后,磷酸化的EphB水平降低,Eph通路被抑制.而DAPT处理组p-EphB水平升高,但总EphB的表达量无明显变化.MG63骨肉瘤细胞培养基中添加具有活性的ephnnB1后,Western blot结果显示EphB磷酸化显著上调,证实Eph通路被激活,骨肉瘤细胞的成球率下降和Sox2、Oct4表达量下降.结论 Notch通路的激活在促骨肉瘤细胞的干细胞样特性发挥重要作用,并可能通过Notch信号通路对EPH通路的下调有关.

关键词：骨肉瘤、肿瘤干细胞、受体、Notch1、EphB1

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资助基金：National Natural Science Foundation of China81241078,81502575;China International Medical Foundation Z-2014-06-15331国家自然科学基金81241078,81502575;卫计委中华国际医学交流基金会Z-2014-06-15331

在线出版日期：2018-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：612-619