慢病毒构建表达人β-防御素3的滑膜间质干细胞及其抑菌活性鉴定

摘要：

目的 检测利用慢病毒介导人β-防御素3 (humanβ-defensin 3,hβD-3)基因转染人滑膜间质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)的安全性及体外抗菌活性.方法 通过膝关节镜手术获取人膝关节交叉韧带及滑膜组织以分离、培养SMSCs,贴块法培养并用磁珠分选仪纯化,通过显微镜观察、免疫荧光鉴定和细胞表面标记对细胞进行鉴定.通过成脂、成骨和成软骨分化诱导分别对细胞多向分化潜能进行测定.利用质粒构建包含hβD-3基因的慢病毒载体并转染SMSCs,绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪确定其DNA含量,使用NOD/SCID小鼠验证其致瘤性.使用琼脂扩散法对转染后的SMSCs进行抑菌活性检测,同时用兔膝关节内金黄色葡萄球菌感染模型验证其体内抑菌作用.结果 贴块法获得的SMSCs经分离纯化后表现出间质干细胞应有的结构和表面标志物,具有多向分化潜能.免疫荧光证实被慢病毒转染的SMSCs能稳定表达hβD-3蛋白.增殖动力学、核型分析、致瘤型分析等证实转染后的SMSCs安全.重组细胞体外和动物模型体内抑菌活性检测显示,传代后的SMSCs(采用P5代细胞)能稳定表达hβD-3并具有抗菌活性.与阴性、阳性对照组比较,低浓度组有一定的抑菌活性,并且随浓度增高,抑菌圈逐渐增大.结论 经重组慢病毒载体感染的人SMSCs能安全稳定地传代并表达hβD-3,体外具有明显的抗菌活性.

关键词：防御素类、滑膜、间质干细胞、慢病毒属

所属期刊栏目：35

分类号：R392-33;Q279;R739.41

资助基金：上海市卫生计生委项目;国家自然科学基金;同济大学人才基金

在线出版日期：2015-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1168-1176