慢病毒介导的aggrecanase-2 shRNA转染对类风湿关节炎患者软骨细胞aggrecan的影响

摘要：

目的 探讨慢病毒介导的agggrecanase-2 shRNA对类风湿关节炎患者软骨细胞aggrecan的影响.方法 术中切取类风湿关节炎患者关节软骨,通过胰酶+Ⅱ型胶原酶两步消化法消化软骨块并培养,取第2～3代软骨细胞.以慢病毒为载体将aggrecanase-2 shRNA5～8转染进入软骨细胞,观察转染后细胞的生长变化;以荧光定量PCR检测转染后第2、5、10天aggrecanase-2 mRNA水平的变化及aggrecan mRNA水平的变化,以循环阈值(cycle threshold,Ct)表示;用免疫组织化学方法检测aggrecan蛋白水平的变化,以积分光密度(integral optical density,IOD)表示,筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导aggrecanase-2 shRNA转染软骨细胞后对细胞生长速度及形态无明显影响.加入病毒液200μl、100μl、50μl后感染复数分别为100、50、25,转染效率分别为90％、60％、30％.转染后aggrecanase-2mRNA的表达水平明显下降,特别是mRNA5,由开始的0.876 3±0.115 6下降至0.069 9±0.015 1 (P＜ 0.05);aggrecan mRNA水平显著上调,由开始的0.992 1±0.201 3增加至3.049 2±0.278 2(P＜ 0.05);aggrecan蛋白表达水平显著提高,由开始的496.160 5±225.673 7增加至4 525.433 0±1 131.813 0(P＜0.05);最佳抑制序列为aggrecanase-2 shRNA5.结论 以慢病毒为载体介导aggrecanase-2shRNA转染骨关节炎患者软骨细胞可有效干扰aggrecanase-2 mRNA表达,相应地增加aggrecan表达,是一种保护aggrecan的有效途径.

关键词：软骨细胞、慢病毒属、软骨蛋白聚糖类、RNA干扰

所属期刊栏目：34

分类号：R734.2;TP309.2;S858.28

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2014-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：936-944