Sestrin2参与调控新生鼠缺氧缺血性脑损伤后细胞自噬机制

摘要：

目的 探讨应激诱导蛋白Sestrin2,对新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞自噬作用及其机制.方法 选择80只新生10日龄SD大鼠(受试鼠)为研究对象.对其中60只建立HIBD模型,并根据这60只受试鼠缺氧缺血(HI)后的处死时间点,将其分别纳入HI后4、8、12、24、72 h组(除HI后24 h组为20只受试鼠外,其余均为10只).对剩余的20只受试鼠仅分离右颈总动脉,既不结扎右颈总动脉,亦不进行缺氧处理,处死时间对应于HI后24 h组,纳入假手术组(n=20).①对HI后4、8、12、24、72 h组及假手术组(各组受试鼠均为10只),获取海马组织标本后,采用蛋白质印迹法,检测Sestrin2、肝酶B1(LKB1)、磷酸化LKB1(p-LKB1)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链(LC)3及凋亡相关蛋白活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(CC)3在受试鼠海马组织中的相对表达量,并采用方差分析及最小显著性差异(LSD)-t法,对上述指标进行6组之间,或HI后4、8、12、24、72 h组分别与假手术组的组间比较.②对于HI后24 h组与假手术组各组剩余的10只受试鼠,获取大脑标本后,采用免疫组织化学SP法,检测海马组织中p-AMPK、LC3及CC3表达水平,包括积分吸光度(IA)值测定及染色结果,并采用t检验,对这3项指标的IA值进行2组比较.本研究通过四川大学动物实验伦理委员会批准[审批文号:SYXK(川)2013-185].结果 ①蛋白质印迹法检测结果显示,HI后4、8 h组受试鼠海马组织中p-mTOR及CC3水平,均分别高于假手术组;HI后12、24 h组受试鼠海马组织中Sestrin2、p-LKB1、p-AMPK、p-mTOR、Beclin1、LC3及CC3水平,均分别高于假手术组;HI后72 h组受试鼠海马组织中Sestrin2及CC3水平,均高于假手术组;并且这些差异均有统计学意义(P<0.05).其中,HI后8 h组受试鼠海马组织中p-mTOR水平最高,HI后24 h组受试鼠海马组织中Sestrin2、p-LKB1、p-AMPK、Beclin1、LC3及CC3水平均最高.6组受试鼠海马组织中LKB1、AMPK及mTOR水平比较,以及HI后4、8、12、24、72 h组受试鼠海马组织中LKB1、AMPK及mTOR水平分别与假手术组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).②免疫组织化学SP法IA值检测结果显示,HI后24 h组受试鼠海马组织中p-AMPK、LC3及CC3表达水平分别为(24106±2393)、(41892±4094)、(61670±4696),均高于假手术组的(15593±1575)、(18941±2131)、(20279±1912),并且差异有统计学意义(t=9.398、P=0.035,t=15.723、P<0.001,t=25.812、P<0.001).免疫组织化学SP法染色结果显示,HI后24 h组受试鼠海马组织中p-AMPK、LC3及CC3呈阳性细胞的表达水平较高.结论 10日龄新生SD大鼠发生HIBD时,其大脑海马组织中Sestrin2可能通过LKB1/AMPK/mTOR信号通路,参与调节神经细胞自噬及凋亡.

关键词：Sestrin2蛋白、大鼠、信号传导、缺氧缺血、脑、自噬、细胞凋亡、印迹法、蛋白质、Sprague-Dawley、动物、新生

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资助基金：国家自然科学基金项目;国家临床重点专业基金项目;四川省青年科技创新团队基金项目

在线出版日期：2020-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：32-41