AMP-活化蛋白激酶信号通路调控新生大鼠缺氧缺血性神经元凋亡机制

摘要：

目的 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型的AMP-活化蛋白激酶(AMPK)、核转录因子FOXO3a及凋亡蛋白活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(CC3)表达水平变化,探讨抑制AMPK/FOXO3a信号通路对新生大鼠缺氧缺血神经元凋亡的保护作用机制.方法 将64只7 d龄SD大鼠按照随机数字表法分为4组:缺氧缺血组(HI组)、假手术组(sham组)、AMPK特异性抑制剂Compound C干预组(干预组)、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组(对照组),每组SD大鼠各为16只.建模方法:对HI组SD大鼠在乙醚麻醉下进行右侧颈总动脉结扎,采用氧、氮混合气体(8％ O2、92％ N2)缺氧处理2.5 h;对sham组SD大鼠仅分离右侧颈总动脉,不结扎,不进行缺氧处理;对干预组和对照组SD大鼠分别于右侧脑室内注射等量Compound C和DMSO,30 min后,采用氧、氮混合气体(8％ O2、92％ N2)进行缺氧处理.分别于建模24 h后处死4组SD大鼠,取大脑皮质,采用Western印迹法定量检测各组SD大鼠模型大脑皮质的AMPK蛋白、p-AMPKα蛋白、总FOXO3a蛋白、细胞核FOXO3a蛋白、细胞质FOXO3a蛋白及CC3表达水平;应用原位缺口末端标记(TUNEL)染色法,检测凋亡神经元细胞.结果 ①与sham组相比,HI组及对照组SD大鼠模型大脑皮质的AMPK蛋白水平与总FOXO3a蛋白水平均无显著变化,并且差异均无统计学意义(P>0.05);p-AMPKα蛋白水平及细胞核FOXO3a蛋白水平均显著增高,细胞质FOXO3a蛋白水平均显著降低,CC3表达水平均显著增高,并且差异均有统计学意义(P<0.01).②与HI组及对照组相比较,干预组SD大鼠模型大脑皮质p-AMPKα蛋白水平及细胞核FOXO3a蛋白水平显著降低,细胞质FOXO3a蛋白水平显著增高,凋亡蛋白CC3表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01).③与sham组相比,HI组及对照组SD大鼠模型大脑皮质神经元细胞凋亡水平(TUNEL呈阳性细胞表达水平)均显著增高,并且差异均有统计学意义(P<0.01);干预组SD大鼠模型大脑皮质神经元细胞凋亡水平,较HI组及对照组显著降低,差异亦有统计学意义(P<0.01).结论 新生大鼠发生HIBD损伤时,AMPK发生磷酸化,活性增高;而抑制AMPK活性,可抑制FOXO3a核转位,下调凋亡蛋白CC3表达水平,减少神经元细胞凋亡.

关键词：AMP-活化蛋白激酶、缺氧缺血、脑、细胞凋亡、神经元、大鼠、新生

所属期刊栏目：13

分类号：R96;R74

资助基金：国家自然科学基金项目81000262;四川省卫生计生委科研基金项目16PJ240;National Natural Science Foundation of China81000262;Scientific Research Fund of Health and Family Planning Commission of Sichuan Province16PJ240

在线出版日期：2017-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：281-286