新生大鼠海马神经元体外氧-糖剥夺再灌注模型的建立

摘要：

目的 体外培养新生大鼠海马神经元,建立神经元氧-糖剥夺再灌注(OGD/R)模型,为临床进一步研究新生儿缺氧缺血性脑损伤奠定基础.方法 以L多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为海马神经元体外培养的生长基质,分离24 h内新生SD大鼠海马,胰蛋白酶水浴振荡消化获得单个细胞,采用Neurobasal维持培养基更继续培养.培养7d后将神经元细胞培养基更换为无糖缺血液,置于95％高纯度氮气(N2)三气培养箱内缺氧处理2h.将其取出更换为正常培养基继续培养24 h,构建神经元OGD/R模型.然后,采用抗微管相关蛋白2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)标记神经元,于荧光显微镜下观察建模前与建模后神经元的形态学改变,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测微管相关蛋白(MAP)2阳性细胞存活率,对OGD/R模型进行评价.结果 荧光显微镜下观察到正常情况下神经元细胞形态结构完整,树突及轴突舒展,交织成网状.建模后,神经元突触回缩,细胞崩解,网状结构被破坏.CCK-8检测结果显示,建模后神经元细胞存活率降低.结论 此方法体外培养神经元细胞纯度在95％以上;使用无糖神经元细胞缺血液联合高纯度N2培养2h,再更换为正常培养基培养的方法,可成功建立神经元细胞的OGD/R模型.

关键词：海马神经元、原代培养、缺血缺氧、脑、氧-糖剥夺再灌注、三气培养箱、体外、大鼠

所属期刊栏目：12

分类号：R33;R59

资助基金：四川省科技厅科技支撑计划资助项目2014FZ0113;Science & Technology Pillar Program by Science & Technology Department of Sichuan Province2014FZ0113

在线出版日期：2016-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：286-290