来氟米特对转化生长因子β1诱导的体培养的大鼠肾小球系膜细胞中Smad2表达的影响

摘要：

目的 观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-B1刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)表达Smad2过程中发挥的作用.方法 建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定造模成功后第7代用于实验.按照对模型大鼠体外培养的肾小球系膜细胞的处理方式不同,将其分为TGF-β1,组(TGF-β1 5ng/mL),LEF-1组(LEF5μg/mL+TGF-β15ng/mL),LEF-2组(LEF 50 μg/mL+TGF-β1 5 ng/mL)和对照组(无血清RPMI 1640培养液+20%胎牛血清).分别于15 min,30 min,1h,2h和6h收集标本,用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(phosphorylation-Smad2,P-Smad2)蛋白表达变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达变化.结果 对照组磷酸化Smad2蛋白少量表达,阳性细胞率为(21.40士1.51)%.TGF-β1组阳性细胞率为(70.00±3.23)%,30 min时表达开始升高,1 h及2 h时表达明显增高,6 h表达开始下降.各时间点LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,阳性细胞率分别为(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,细胞荧光强度呈减弱趋势.与TGF-β1组相比,LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,差异有显著意义(P<0.05).但LEF-1组和LEF-2组与对照组比较,差异无显著意义(P>0.05).肾小球系膜细胞中Smad2mRNA相对表达量,TGF-β1组显著高于对照组,2 h时达高峰.LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA显著低于TGF-β1组,差异有显著意义(P<0.01);但LEF-1组和LEF-2组间比较,差异无显著意义(P>0.05).LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA相对表达量1 h时较低,之后逐渐升高,说明随时间延长,来氟米特对体外培养的肾小球系膜细胞干预作用逐渐减弱.结论 经转化生长因子-β1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化Smad2蛋白和Smad2mRNA相对表达量分别增加,来氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA表达水平,为来氟米特的肾脏保护作用提供理论依据.

关键词：肾小球系膜细胞、转化生长因子-β1、Smad2、来氟米特

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分类号：R73;R57

资助基金：广东省自然基金项目5000424;广州市科技攻关计划项目2006Z3-E0231

在线出版日期：2011-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：411-416