shRNA沉默 Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

摘要：

目的:探讨下调
Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。
方法:设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列，克隆入LV3（H1/GFP&Puro）载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞，嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平；克隆存活法检测细胞存活；流式法检测细胞周期；免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果:两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达，RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低（
P＜0.01），Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比（SER）分别为1.39和1.18；两株
Sp1敲除组细胞经辐照后G
2/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。
结论:shRNA沉默
Sp1增大了X线诱导的G
2/M期阻滞，加重了DNA双链断裂程度，提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。

关键词：shRNA沉默、Sp1基因、胶质瘤细胞、放射敏感性

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资助基金：甘肃省自然科学基金21JR7RA097;陇原青年创新创业人才项目2021LQGR63;Natural Science Foundation of Gansu Province21JR7RA097;Longyuan Youth Innovation and Entrepreneurship Talent Project2021LQGR63

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：638-642