乏氧诱导因子1α在电离辐射诱导人乳腺癌细胞自噬性死亡中的作用

摘要：

目的 探讨乏氧诱导因子1α(HIF-1α)在辐射诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬性死亡中的作用.方法 将人乳腺癌MCF-7细胞分为对照组(常氧组,21％氧气)、照射组(8GyX射线)、乏氧组(150 μmol/L CoCl2)、乏氧加照射组(150 μmol/L CoCl2+8 Gy).150 μmol/L CoCl2处理细胞模拟乏氧条件.Western blot法检测HIF-1α及MAPLC3蛋白表达；MDC及Hoechst染色方法分别用于检测细胞自噬和凋亡变化情况；克隆形成方法检测细胞辐射敏感性.构建携带人靶向HIF-1α-siRNA的反转录病毒载体,建立MCF-7 HIF-1α Ri沉默细胞模型,将细胞分为对照组(常氧组)、照射组(8 Gy)、乏氧组(CoCl2处理)、乏氧加照射组(CoCl2+8 Gy),检测细胞辐射敏感性、自噬及凋亡情况.结果 与对照组和照射组相比,HIF-1蛋白在乏氧组和乏氧加照射组表达明显增加,分别为0、0、1.00和1.89.与对照组相比,MAPLC3蛋白在照射组、乏氧组、乏氧加照射组的表达均明显上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值分别为1.15、1.73、2.38和3.60.细胞辐射敏感性顺次降低,常氧+三甲基腺嘌呤(3MA)组＞常氧组＞乏氧+3MA组＞乏氧组.成功构建HIF-1α沉默模型(pSUPER-HIF-1α Ri)与空载体对照模型(pSUPER),并检测了2种细胞的辐射敏感性.与常氧组相比,乏氧组MCF-7-pSUPER细胞存活分数显著增加(t=3.080、6.946、6.658、6.380,P＜0.05),辐射敏感性降低.而MCF-7-pSUPER-HIF-1α Ri细胞,常氧与乏氧条件下细胞存活分数无明显改变.不同处理组(照射组、乏氧组和乏氧加照射组)的MCF-7-pSUPER-HIF-1α Ri细胞与MCF-7-pSUPER细胞相比较,自噬百分率分别降低21.1％、25.5％和15.5％(t=-4.635、-4.738、-6.354,P＜0.05),但凋亡百分率差异无统计学意义.结论 在人乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α可增加辐射诱导的自噬,同时降低辐射敏感性,对细胞凋亡无影响.

关键词：自噬、X射线、乏氧、乏氧诱导因子1α、辐射敏感性

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资助基金：国家自然科学基金30970682,30770649;国家大学生创新项目2010A72110

在线出版日期：2013-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：455-459