肝细胞移植实验研究中大鼠肝细胞的冻存与复苏初探

摘要：

目的以大鼠为实验对象,研究冷冻复苏及降温速率对肝细胞活率、形态和功能的影响.方法改良Seglen门静脉-下腔静脉双插管胶原酶灌注法分离获取游离肝细胞.分别将肝细胞按B程序(渐进式降温程序:-1.5 ℃/min至-18 ℃,保持5 min,-20 ℃/min至-80 ℃,投入液氮保存);C程序(慢速线形冷冻程序 :-2.5℃/min至-80 ℃,投入液氮保存)进行处理.2组冻存细胞分别在液氮中冷藏3、15、30 d后,40 ℃水浴复苏.检测复苏肝细胞活率、形态结构、蛋白质合成功能的改变.结果 (1)B组、C组冻存后各时间点细胞活率及3H-亮氨酸合成量较新鲜组(A组)均有明显下降(P<0.001),C组明显低于B组(P<0.005),2组各组内在不同时间点的活率及3H-亮氨酸合成量无明显差别(P>0.05).(2)光学显微镜下见复苏细胞与新鲜细胞无明显区别.电子显微镜下可见B、C组细胞超微结构有明显改变,但B组程度较C组轻.结论降温速率的快慢直接关系冻存肝细胞的效果.冷冻复苏过程使细胞膜完整性受损、细胞质内容丢失导致细胞在复苏后活率降低、细胞功能丧失.肝细胞在液氮中保存,其活率及蛋白质合成功能并不随保存时间的延长而降低.

关键词：大鼠、Sprague-Dawley、肝、细胞分离、细胞存活、低温保藏、工艺学、医学实验室、评价研究

所属期刊栏目：36

分类号：R6(外科学)

在线出版日期：2004-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：369-372