趋化素样因子1过表达促进强直性脊柱炎髋关节韧带成纤维细胞增殖和向成骨细胞转化的实验研究

摘要：

目的 探索趋化素样因子1(CKLF1)对AS髋关节韧带成纤维细胞增殖和向成骨细胞转化的影响.方法 正常和AS髋关节韧带组织分别取自我科6例股骨颈骨折和4例重度AS拟行髋关节置换的患者.组织经常规消化得单细胞,并行倒置相差显微镜观察和抗波形蛋白(vimentin)免疫荧光染色(IFC)检测.对上述髋关节韧带组织及成纤维细胞分别行原位(in situ)和体外(in vitro)培养,重组腺相关病毒(rAAV)-lacZ、rAAV-hCKLF1转染21 d后收集标本.细胞增殖、致炎性细胞因子分泌、成骨关键靶基因、CKLF1及CCR4表达等分别采用ELISA、IFC和荧光定量反转录(RT)-PCR检测.各组间数据用单因素方差分析(LSD法),2组间比较采用t检验.结果 第2代正常和AS细胞抗vimentin IFC检测均为阳性,表明分离培养的细胞为成纤维细胞.rAAV-hCKLF1转染21 d后,苏木精-伊红(HE)染色并计数单位面积下的细胞数、水溶性四氮唑法(WST-1)检测细胞增殖能力和Hoechst 33258检测细胞DNA含量均显示,CKLF1转染促进细胞增殖[与无病毒转染组、lacZ组相比,差异具有统计学意义(F=6.98,64.32,115.91;P<0.05或P<0.01)];正常和AS髋关节韧带组织及成纤维细胞分泌的致炎性细胞因子(IL-6和TNF-α),均明显升高[与无病毒转染组、lacZ组相比,差异具有统计学意义(F=34.57,8.89;P<0.05或P<0.01)];此外,与无病毒转染组、lacZ组及正常成纤维细胞的各组相比,CKLF1尚能促进AS成纤维细胞表达特异性骨细胞外基质蛋白[骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)];荧光定量RT-PCR也得到了与上述检测结果相近的发现.结论 过表达CKLF1促进成纤维细胞增殖和致炎性细胞因子分泌,增强成骨相关靶基因的转录,推测CKLF1可能在AS关节病理性骨化过程中发挥重要作用.

关键词：脊柱炎、强直性、骨化、异位性、成纤维细胞、转染、趋化素样因子1

所属期刊栏目：21

分类号：R44;R39

资助基金：国家自然科学基金81641175,81672183;北京大学人民医院院内发展基金RDB2015-10,RDY2016-15;2015年国际骨关节炎研究协会OARSI 访问学者奖学金;2016年国际软骨修复协会ICRS 奖学金;2016年北京厚爱关节健康公益基金会青年学者奖学金;2017年德国骨科医师大会DKOU奖学金 National Natural Science Foundation of China81672183, 81641175;the Research and Development Funds of Peking University People's HospitalRDB2015-10, RDY2016-15;the Osteoarthritis Research Society International OARSI 2015 Scholarship Award;International Cartilage Repair Society ICRS 2016 Scholarship;Beijing Joint Care Foundation 2016 Young Investigators Scholarship;German Congress for Orthopedics and Trauma Surgery 2017 DKOU Scholarship

在线出版日期：2017-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：614-621,后插2