脂氧素A4干预尿酸诱导人脐静脉内皮细胞发生氧化应激反应的机制研究

摘要：

目的 探讨脂氧素A4(LXA4)对尿酸诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)发生氧化应激反应的干预作用,并初步探讨其可能机制.方法 以尿酸刺激HUVEC构建氧化应激模型,选择LXA4及二甲苯基碘(DPI)、鱼藤酮对模型进行干预.利用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)作为荧光探针,测定HUVEC活性氧化物(ROS)生成量;光泽精增强的化学发光法测定HUVEC内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性;蛋白质印迹法测定HUVECs内NADPH氧化酶p47phox亚基在胞质、胞膜表达.所有结果均以对照组相对表达量描述,以重复测量方差分析和最小显著性差异检验(LSD)进行统计学分析.结果 不同浓度和作用时间尿酸可以刺激HUVEC生成ROS(F=7.286,F=4.532,P均＜0.05),与空白对照组(100±11)比较,80 mg/L(177±18)、120 mg/L(226±29)、160 mg/L(225±16)尿酸组ROS生成量显著升高(t=4.127,t=7.591,t=7.236,P均＜0.05),与基线(100±8)比较,3 h(143±16)、6 h(140±17)、12 h (183±20)、24 h(240±29)、48 h(160±22)时间点ROS生成量显著升高(t=3.688,t=3.513,t=4.526,t=8.269,t=3.829,P均＜0.05);不同浓度、不同时间LXA4可以抑制ROS生成(F=4.008,F=4.497,P均＜0.05),与0 nmol/L(202±20)比较,10 nmol/L(162±16)、100 nmol/L(132±15) LXA4可以明显抑制ROS生成(t=3.712,t=4.083,P均＜0.05),与0 min(269±39)比较,LXA4预处理15 min(160±16)、30 min(158±21)、1 h(136±13)、2 h(140±13)后ROS生成量显著下降(t=6.373,t=6.426,t=7.125,t=6.981,P均＜0.05);与尿酸组(252±31)比较,LXA4+尿酸组(145±29)、DPI+尿酸组(154±27)ROS生成量显著降低(t=6.356,t=5.853,P均＜0.05),而Rot+尿酸组(241±32)无明显改变(t=1.027,P＞0.05);在NADPH氧化酶活性比较中,尿酸组(144±16)显著高于空白对照组(100±13) (t=3.659,P＜0.05),LXA4+尿酸组(119±14)显著低于尿酸组(t=3.124,P＜0.05);NADPH氧化酶亚基p47phox表达,尿酸组(47±6)在胞质表达显著低于空白对照组(100±8)(t=7.562,P＜0.05),而LXA4+尿酸组(84±6)较尿酸组显著增加(t=5.386,P＜0.05);尿酸组p47phox(328±36)在胞膜表达显著高于空白对照组(100±4)(t=12.817,P＜0.05),而LXA4+尿酸组(183±30)较尿酸组显著降低(t=5.129,P＜0.05).结论 LXA4可能通过阻止NADPH氧化酶亚基p47phox由胞质转移到胞膜来抑制NADPH氧化酶激活,以此干预尿酸溶液诱导HUVECs发生氧化应激反应.

关键词：脂氧素类、尿酸、脐静脉、内皮细胞、氧化性应激、活性氧

所属期刊栏目：21

分类号：R44;R73

在线出版日期：2017-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：252-257,后插1