ARID1A基因表达下调对卵巢透明细胞癌ES2细胞生物学功能的影响

摘要：

目的：探讨AT丰富结合域1A（ARID1A）基因表达下调对卵巢透明细胞癌细胞系ES2细胞生物学功能的影响。方法（1）设计3对ARID1A基因小分子干扰RNA（siRNA）序列，分别命名为siN1（即ARID1A-705）、siN2（即ARID1A-1513）、siN3（即ARID1A-2282），以及1对与ARID1A基因无关（阴性对照）的siRNA序列。分别采用逆转录（RT）-PCR技术和蛋白质印迹（western blot）法检测3种不同的ARID1A基因siRNA瞬时转染后ES2细胞中ARID1A mRNA和蛋白的表达水平，选择最佳沉默效应的siRNA干扰片段（即siN3）用于后续实验。（2）实验分为3组，即siN3转染组、阴性对照组和空白对照组，采用活细胞计数（CCK-8）法检测转染不同时间（6、24、48、72、96 h）后3组细胞的增殖活性，以吸光度（A）值表示；流式细胞仪检测转染后3组细胞的凋亡情况；体外侵袭实验检测转染后3组细胞的侵袭能力；western blot法检测转染后ES2细胞中核因子κB（NF-κB）、膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）及基质金属蛋白酶2（MMP2）蛋白的表达水平。结果（1）RT-PCR技术检测显示，siN1、siN2、siN3瞬时转染后ES2细胞中ARID1A mRNA的表达水平分别为0.0078±0.0057、0.0068±0.0003、0.0028±0.0003，均明显低于阴性对照（0.0346±0.0013；P均<0.01）；western blot法检测显示，siN1、siN2、siN3瞬时转染后ES2细胞中ARID1A蛋白的表达水平分别为0.4394±0.0007、0.4244±0.0050、0.3860±0.0058，均明显低于阴性对照（0.7324±0.0303；P均<0.01）。故用于后续实验的最佳沉默效应的siRNA干扰片段即为siN3。（2）CCK-8法检测显示，转染6 h后，siN3转染组ES2细胞的增殖活性分别与阴性对照组及空白对照组（分别为0.506±0.010、0.491±0.006、0.498±0.009）比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；而转染24、48、72、96 h后，siN3转染组ES2细胞的增殖活性明显高于阴性对照组及空白对照组（P<0.01）。流式细胞仪检测显示，siN3转染组ES2细胞的凋亡率为（20.0±3.9）%，明显低于阴性对照组和空白对照组[分别为（31.5±5.0）%、（34.0±4.2）%；P<0.05]。体外侵袭实验检测显示，siN3转染组穿膜细胞数为（60.4±2.9）个，明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为（54.2±3.5）、（52.1±3.8）个；P<0.01]。western blot法检测显示，转染72 h后siN3转染组ES2细胞中NF-κB、MT1-MMP及MMP2蛋白的表达水平分别为1.85±0.16、0.37±0.08、1.38±0.11，明显高于阴性对照组（分别为0.93±0.11、0.17±0.05、0.86±0.06；P<0.05）和空白对照组（分别为0.94±0.04、0.15±0.08、0.85±0.10；P<0.01）。结论 ARID1A基因表达下调使卵巢透明细胞癌ES2细胞的增殖活性增高，细胞凋亡减少，侵袭能力增强；其侵袭作用机制可能与激活NF-κB信号传导通路，上调MT1-MMP蛋白的表达，进而通过提高MMP2蛋白的表达，促进肿瘤细胞的侵袭有关。

关键词：卵巢肿瘤、腺癌、透明细胞、细胞系、肿瘤、核蛋白质类、转录因子、RNA、小分子干扰

所属期刊栏目：51

分类号：R73;R39

在线出版日期：2016-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：209-214,215