RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌细胞IGF1R基因表达及增强顺铂敏感性的实验研究

摘要：

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)HO8910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R)基因的表达,探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响.方法 将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA)、非特异性siRNA分别转染细胞;转染后48h通过实时PCR、蛋白印迹法(western blot)、流式细胞仪分别测定IGF1R mRNA、蛋白的表达及细胞周期变化;转染后24、48、72、96 h通过细胞增殖/毒性检测试剂cell counting kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;于转染后24 h给予不同浓度的顺铂作用24 h,通过CCK-8法测定细胞增殖抑制率;于转染后24 h给予10μg/ml顺铂作用24 h,通过流式细胞仪及蛋白印迹法分别检测细胞凋亡和B淋巴细胞白血病/淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)蛋白的表达.结果 (1)转染后48 h,IGF1R mRNA和蛋白的表达水平均明显下调,转染后IGF1R mRNA的表达水平下调了85.5%(P＜0.01).(2)转染后48、72、96 h,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性分别为1.71±0.13、2.32±0.23、2.79±0.28,与未转染及转染非特异性siRNA的对照细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)转染后48 h有24.37%的细胞处于G2期(P＜0.05).(4)转染后24 h联合不同浓度的顺铂作用24 h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/ml时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率分别为(25.94±0.08)%、(40.25±0.05)%、(59.48±0.03)%、(74.18±0.08)%,差异均有统计学意义(P＜0.01).(5)在转染siRNA 24 h后给予10μg/ml顺铂作用24 h,可使细胞的凋亡率增加至17.95%(P＜0.05),并使Bcl-2蛋白的表达水平下调.结论 通过RNAi技术可有效抑制IGF1R基因在转录和翻译水平的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,出现G2期阻滞,明显提高细胞对顺铂化疗的敏感性.

关键词：卵巢肿瘤、受体、IGF1型、RNA干扰、顺铂、药物筛选试验、抗肿瘤

所属期刊栏目：43

分类号：R71(妇产科学)

资助基金：国家自然科学基金30471808;上海市科委资助项目04JC14045

在线出版日期：2008-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：45-49