核苷酸还原酶小亚基反义寡核苷酸对人绒毛膜癌细胞体外生长的影响

摘要：

目的探讨核苷酸还原酶小亚基(RRM2)反义寡核苷酸(ASODN)对人绒毛膜癌细胞株JAR细胞体外生长的影响.方法以脂质体为载体,将人工合成的分别位于RRM2 mRNA核苷酸序列第626～645(编码区)和第1572～1591 ( 3′端非编码区) 位点且全程硫代修饰的两条ASODN片断(前者称ASODN1,后者称ASODN2)导入JAR细胞中,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,免疫印迹法和RT-PCR技术检测ASODN对RRM2蛋白和mRNA表达的影响.结果 (1)ASODN1对JAR细胞的抑制作用呈剂量和时间效应:100 nmol/L ASODN1作用后JAR细胞的生长抑制率为(8.10±1.18)%;随着ASODN1浓度的增加细胞生长抑制作用增强,ASODN1浓度为400 nmol/L时其细胞生长抑制率为(27.70±3.68)%,与ASODN1浓度为0时[(0.16±0.12)%]比较,差异有极显著性(P=0.000).200 nmol/L ASODN1作用24 h后,细胞生长抑制率为(13.98±1.45)%; 48 h[为(18.90±4.85)%]达到高峰,72 h抑制作用[为(19.53±5.00)%]不再明显增强,分别与作用时间为0时[(0.16±0.31)%]比较,差异均有极显著性(P＝0.000).(2)JAR细胞RRM2蛋白和mRNA的表达:200 nmol/L ASODN1作用12 h, RRM2蛋白和mRNA表达水平开始下降;作用24 h,细胞RRM2蛋白和mRNA表达下降更明显;作用48 h, RRM2蛋白和mRNA表达达最低水平,与作用时间也为48 h,但未加药者比较,差异有显著性(P<0.05);72 h有所恢复.ASODN2和对照寡核苷酸(即与ASODN1核苷酸组成一样但序列打乱的寡核苷酸类似物)对JAR细胞增殖及RRM2蛋白和mRNA的表达无明显影响,但ASODN2与ASODN1联合应用,对JAR细胞生长的抑制作用和对RRM2蛋白和mRNA表达的下调作用显著强于单用ASODN1(P<0.05).结论 ASOND1具有选择性和特异性抑制JAR细胞生长和RRM2的转录和翻译.联合应用针对RRM2基因不同位点的ASODN是提高反义药物作用的重要方法之一.

关键词：核苷酸还原酶类、寡核苷酸类、反义、绒毛膜癌、肿瘤细胞、培养的

所属期刊栏目：39

分类号：R73;R97

在线出版日期：2004-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：465-468