三种方法转染Math1基因效率和细胞毒性研究

摘要：

目的 比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体体外携带目的 基因Math1对HEK293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,以期筛选理想的基因转染载体材料.方法 选用重组腺病毒、LipofectamineTM 2000、Superfect纳米材料作为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1-EGFP,并且根据不同转染载体说明步骤优化体外转染条件,分别转染293T细胞.在一定的时间内利用荧光显微镜观察细胞转染结果并计数阳性细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测三种不同载体体外细胞毒性,应用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)技术检测转染阳性细胞中目的 基因Math1的mRNA表达情况.结果 在优化的体外转染条件下,重组腺病毒载体介导的细胞转染率达到了94％以上,脂质体和商品化Supeffect纳米材料转染的细胞中,荧光蛋白表达率分别为73％和80％以上,同时,商品化Superfect纳米材料在达到80％转染率的条件下,细胞存活率为90％.应用RT-PCR方法 证实,三种载体转染细胞均有Math1基因的mRNA的表达.结论 商品化Supeffect纳米材料作为一种新型的、安全有效的纳米转染材料,能够成功携带耳聋治疗关键基因Math1转染293T细胞,以期在内耳基因治疗的研究当中得到有效的应用.

关键词：Math1、基因转染、基因载体、纳米材料

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分类号：R349.6;R394.8(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家863计划2007AA02Z150;国家自然科学基金重点项目30730040;面上项目30871398,30571017,30000189;海外青年学者合作基金30628030;北京市自然科学基金7042061;国家科技支撵计划重大项目2007BA118B12,2006BA102B00

在线出版日期：2011-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：92-96