野生型SLC26A4基因表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

摘要：

目的 构建含有野生型SLC26A4基因和绿色荧光蛋白基因(pEGFP,enhanced green fluorescent protein)的真核共表达载体,为指导临床SLC26A4相关耳聋的基因诊断及产前诊断奠定实验基础.方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-SLC26A4真核表达质粒.经脂质体介导转染HEK293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-SLC26A4真核表达质粒在HEK293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SLC26A4 mRNA的表达,利用Western Blot(蛋白印迹)方法 检测Pendrin的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有SLC26A4基因片段,基因测序结果与GenBank中SLC26A4序列相同.重组pEGFP-SLC26A4真核表达质粒转入HEK293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出SLC26A4的条带,Western Blot检测出87 kDa大小的蛋白.结论 本文成功地构建了含有人全长SLC26A4基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物HEK293细胞系中表达.

关键词：SLC26A4、质粒、表达

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分类号：R349.6;R394.8(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金青年项目30801285;北京市科技新星计划2009B34

在线出版日期：2011-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：77-81