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摘要: 目的:探讨WNT2B基因高表达成纤维细胞通过激活巨噬细胞促进克罗恩病肠道组织损伤的机制。方法:生物信息分析、病理组织研究及细胞实验研究。生物信息分析方面,收集课题组前期炎症性肠病(IBD)患儿结肠组织细胞生物信息研究数据,再次进行单细胞测序分析。病理组织研究方面,以2022年7至9月于广州市妇女儿童医疗中心消化科住院行结肠镜检查确诊为克罗恩病的10例患儿为研究对象,每例患儿均分别取结肠炎症明显或溃疡部位组织及邻旁炎症轻微或正常部位组织,根据结肠镜下外观显示炎症明显或溃疡部位组织为炎症组,炎症轻且无溃疡部位组织为非炎症组。结肠组织行HE染色观察其病理情况,组织免疫荧光检测巨噬细胞浸润和CXCL12的表达情况。细胞实验研究方面,转染了WNT2B质粒或空载质粒的成纤维细胞分别与有或无经盐霉素处理的巨噬细胞共培养,蛋白质印迹法检测Wnt经典通路蛋白表达情况;使用SKL2001处理的巨噬细胞作为实验组,磷酸盐缓冲液处理的巨噬细胞为对照组,采用实时荧光定量PCR(qPCR)反应、酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞CXCL12的表达及分泌情况。组间比较采用
t检验或秩和检验。
结果:单细胞测序分析提示巨噬细胞是IBD结肠组织的主要细胞,高表达WNT2B基因的成纤维细胞和巨噬细胞存在相互作用关系。病理组织研究中,10例患儿[年龄(9.3±3.8)岁,男7例、女3例]的结肠组织HE染色显示,炎症组结肠组织病理评分高于非炎症组[4(3,4)比2(1,2)分,
Z=3.05,
P=0.002],组织免疫荧光提示每高倍镜视野中炎症组巨噬细胞浸润数明显高于非炎症组[(72.8±10.4)比(8.4±3.5)个,
t=25.10,
P<0.001],炎症组每高倍镜视野中表达CXCL12的细胞明显多于非炎症组[(14.0±3.5)比(4.7±1.9)个,
t=14.68,
P<0.001]。细胞实验中,蛋白质印迹法提示与转染了WNT2B质粒的成纤维细胞共培养的巨噬细胞磷酸化的糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)水平升高,而盐霉素可逆转这一现象;qPCR提示实验组中CXCL12的转录水平高于对照组(6.42±0.04比1.00±0.03,
t=183.00,
P<0.001),酶联免疫吸附试验显示实验组中CXCL12的表达及分泌水平高于对照组[(465±34)比(77±9)ng/L,
t=13.21,
P=0.006]。
结论:WNT2B基因高表达成纤维细胞分泌WNT2B蛋白,激活巨噬细胞Wnt经典信号通路,从而促进巨噬细胞CXCL12的表达和分泌,诱导克罗恩病肠道炎症的发展。
关键词: 巨噬细胞、成纤维细胞、基因
所属期刊栏目: 61
资助基金: 国家自然科学基金82073174,81802339;广东省基础与应用基础研究基金2022A1515012406;广州市医学重点学科(儿童消化内科)建设项目011006003;National Natural Science Foundation of China82073174, 81802339;Foundation for Basic and Applied Basic Research of Guangdong Province2022A1515012406;Construction Project of Guangzhou Medical Key Subject Pediatric Department of Gastroenterology011006003
在线出版日期: 2023-07-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
页数: 共8页
页码: 606-613
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