顺铂诱导氧化应激引起耳蜗血管纹周细胞线粒体途径的细胞凋亡

摘要：

目的:探讨顺铂是否通过诱导氧化应激水平升高引起耳蜗血管纹毛细血管周细胞线粒体途径的细胞凋亡。方法:将20只6~8周的雄性C57BL/6J小鼠分为对照组和顺铂组；同时原代培养小鼠耳蜗血管纹周细胞并鉴定，分为对照组、顺铂组和N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）+顺铂组。听性脑干反应（ABR）检测小鼠听力变化，苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠耳蜗血管纹形态学变化，总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检测试剂盒（WST-1法）和硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）法分别检测SOD活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，DCFH-DA荧光探针检测周细胞上活性氧的含量，Hoechst 33342和流式细胞术检测周细胞的凋亡率，免疫荧光技术检测耳蜗血管纹上周细胞的凋亡相关蛋白分布表达，免疫组化和蛋白免疫印迹法（WB）检测凋亡相关蛋白、线粒体相关蛋白的表达，Mito SOX
TM-red和JC-1检测周细胞线粒体功能，伊文思蓝染色观察血迷路屏障（blood labyrinth barrier，BLB）的通透性。采用SPSS 18.0软件进行统计分析。
结果:与对照组相比，顺铂组可升高小鼠听力阈值和Ⅰ波潜伏期（
t值为4.72和12.25，
P值均<0.05），升高耳蜗和周细胞内氧化应激水平（
t=38.34，
P<0.01），使耳蜗血管纹结构紊乱皱缩，BLB通透性增加［伊文思蓝渗漏（1.08±0.42）AU比（0.55±0.23）AU，
t=4.64，
P<0.05］，差异均有统计学意义。顺铂组小鼠耳蜗血管纹细胞凋亡蛋白c-Caspase-3和Bax的表达增加（
t值为5.01和6.33，
P值均<0.01），且顺铂可使原代培养的周细胞凋亡并上调c-Caspase-3、Bax的表达（
P值均<0.05），NAC+顺铂组可逆转顺铂诱导的周细胞凋亡（
P<0.05）。顺铂使周细胞线粒体功能损伤，诱导线粒体向胞浆释放凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor，AIF）和细胞色素C（cytochrome-c，Cyt-c），NAC+顺铂组可逆转顺铂诱导的线粒体损伤（
P值均<0.05）。
结论:顺铂可升高耳蜗内氧化应激水平引起C57BL/6J小鼠耳蜗血管纹周细胞线粒体途径凋亡，从而提高BLB的通透性，造成听力损失。

关键词：顺铂、耳毒性、周细胞、氧化应激、细胞凋亡、线粒体

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资助基金：国家自然科学基金81960188;浙江省自然科学基金探索项目LY21H130001;National Natural Science Foundation of China81960188;Exploration Project of Natural Science Foundation of Zhejiang ProvinceLY21H130001

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1093-1101