生物钟基因与MEN2型甲状腺髓样癌相关性分析

摘要：

目的:探讨生物钟基因
CLOCK、
BMAL1与多发性内分泌腺瘤病2型（multiple endocrine neoplasia 2，MEN2型）甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）的相关性。
方法:回顾性分析2013年1月至2021年9月在青岛大学附属烟台毓璜顶医院病理确诊为MEN2型MTC的病例13例（男性8例，女性5例，年龄15~69岁）及同期随机选取的非MEN2型MTC病例13例（男性7例，女性6例，年龄33~74岁）。分析比较2组患者的临床指标，并利用免疫组织化学、实时荧光定量PCR（quantitative real time PCR，qPCR）等技术检测CLOCK、BMAL1在MEN2型MTC组织与癌旁组织、非MEN2型MTC组织间的表达差异；分析淋巴结转移数量与CLOCK、BMAL1表达相关性；蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网络分析结合qPCR和相关性分析挖掘MEN2常见突变基因
RET表达与生物钟基因间的表达调控关系；利用地塞米松节律同步化后脂多糖细胞刺激试验验证MEN2细胞节律紊乱特点。采用独立样本
t检验对数据进行分析。
结果:本研究MEN2型MTC病例呈现典型
RET基因突变；临床相关指标分析发现MEN2型MTC血清降钙素水平、肿瘤直径及转移淋巴结数量，均较非MEN2型MTC升高，差异均有统计学意义（
t值分别为2.76、2.53、2.26，
P值均<0.05）。免疫组织化学结果显示，生物钟基因CLOCK、BMAL1在MEN2型MTC癌组织中高表达，而在癌旁正常甲状腺滤泡内阴性表达，且表达水平高于非MEN2型MTC；qPCR结果显示，在MEN2型MTC癌组织中
CLOCK基因表达量高于非MEN2型MTC以及癌旁正常组织的表达量，差异均有统计学意义（
t值分别为2.68和2.86，
P值均<0.05）；
BMAL1基因表达量高于非MEN2型MTC以及癌旁正常组织的表达量，差异均有统计学意义（
t值分别为2.21和2.35，
P值均<0.05）。相关性分析发现MEN2型MTC患者
CLOCK、
BMAL1基因表达水平与淋巴结转移数量呈正相关（
r=0.65，
P<0.001；
r=0.52，
P=0.005）。PPI网络分析发现RET和CLOCK间存在调控关系，依据qPCR结果做进一步的相关性分析，提示
CLOCK基因的表达和
RET基因的异常表达呈正相关（
r=0.96，
P<0.001）。地塞米松节律同步化后再用脂多糖刺激离体培养的细胞发现同步化12 h时生物钟基因
CLOCK、
BMAL1在MEN2型MTC细胞中的表达（0.47±0.22、2.60±1.48）显著低于癌旁组织细胞中的表达（1.70±1.62、8.23±2.52），差异有统计学意义（
t=5.04，
P=0.007；
t=3.34，
P=0.029）。
结论:生物钟基因
CLOCK、
BMAL1与MEN2型MTC的发生发展存在相关性，可能是MEN2型MTC新治疗策略开发的潜在靶点。

关键词：甲状腺肿瘤、甲状腺髓样癌、多发性内分泌腺瘤病2型、CLOCK、BMAL1

所属期刊栏目：57

资助基金：山东省泰山学者工程资助项目ts20190991;华南肿瘤学国家重点实验开放课题HN2022?09;Taishan Scholar Project of Shandong Provincets20190991;Open Funds of State Key Laboratory Oncology in South ChinaHN2022?09

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1079-1086