miR-18a促进自噬增强人鼻咽癌细胞株放疗敏感性的研究

摘要：

目的:探索miR-18a过表达和抑制表达对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放疗敏感性的影响及可能的机制。方法:采用miR-18a过表达质粒miR-18a模拟物和抑制表达质粒miR-18a遏制物及空白对照质粒转染人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2细胞，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（WB）检测其对毛细血管扩张性共济失调症突变（ataxia telangiectasia mutated，
ATM）基因和蛋白表达的影响。构建miR-18a过表达和抑制表达的人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2细胞株。四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测miR-18a过表达和抑制表达联合放疗处理前后对人鼻咽癌细胞株生长的影响，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，克隆形成实验检测细胞放疗敏感性，吖啶橙染色结合WB检测细胞自噬水平及自噬相关蛋白表达。采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，2组间均数比较采用独立样本
t检验。
结果:100、200 nmol/L miR-18a模拟物转染CNE1和CNE2细胞48 h后，与对照组相比，
ATM mRNA表达受到显著抑制（CNE1相对表达量为0.174±0.139和0.003±0.001，
t值为9.939和19 470.783；CNE2：相对表达量为0.024±0.008和0.019±0.012，
t值为270.230和137.746，
P值均<0.001），72 h后，
ATM蛋白水平显著下降；100、200 nmol/L miR-18a遏制物转染48 h后，CNE1细胞中
ATM转录显著增加（CNE1相对表达量为9.419±2.495和2.500±1.063，
t值为-4.427和-41.241，
P值均<0.05）；CNE2细胞中
ATM转录亦显著增加（相对表达量为7.210±0.171和115.875±15.805，
t值为-62.789和-12.589，
P值均<0.05），72 h后，
ATM蛋白水平增高。miR-18a过表达的CNE1和CNE2细胞放疗后与CNE1和CNE2细胞单纯放疗相比，细胞增殖受到明显抑制（
P值均<0.05）；稳定抑制miR-18a表达与单纯放疗相比，细胞增殖能力增加（
P值均<0.01）。100 nmol/L miR-18a模拟物转染联合放疗组与单纯放疗组相比，CNE1细胞凋亡率增加［（22.9±2.1）%比（16.3±1.0）%，
t=-4.870，
P<0.01］。稳定过表达miR-18a联合放疗与单纯放疗相比，G1期和G2/M期的细胞比例显著减少［（20.2±3.0）%比（29.8±4.4）%，
t=3.119；（21.5±0.9）%比（33.4±3.1）%，
t=6.410，
P值均<0.05］，S期的细胞比例显著增加［（56.7±4.9）%比（36.8±6.4）%，
t=-4.246，
P<0.05］。稳定过表达miR-18a的CNE1细胞与对照细胞相比，放疗后克隆形成能力下降、自噬溶酶体数量增加、自噬相关LC3表达增加（
P值均<0.05），p62没有明显变化。
结论:miR-18a过表达可以增强人鼻咽癌细胞放疗敏感性，其机制与其抑制
ATM表达，去除G1/S，G2/M期阻滞，诱导细胞自噬和凋亡有关。

关键词：鼻咽肿瘤、miR-18a、放疗敏感性、自噬

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资助基金：广东省科技计划项目2017A020215073，2014A020212619;广东省自然科学基金博士启动项目2015A030310073;Science and Technology Planning Project of Guangdong Province2017A020215073, 2014A020212619;The PhD Start up Fund of Natural Science Foundation of Guangdong Province2015A030310073

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：736-745