沉默信息调节因子1促进鼻咽癌增殖、迁移和脂质代谢机制的研究

摘要：

目的:分析沉默信息调节因子1（silent information regulator transcript-1，SIRT1）在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）组织和细胞中的表达差异，探讨SIRT1对NPC细胞增殖和迁移的影响，研究SIRT1对NPC细胞脂质代谢的影响及调控机制。方法:实验对象：组织标本来源于2019—2020年间就诊于南通大学附属医院耳鼻咽喉科并进行鼻咽部组织活检的患者，其中男6例，女6例，年龄27~72岁；其中经病理确诊的鼻咽癌7例，正常鼻咽部黏膜5例。另NPC细胞系CNE1、CNE2、5-8F和6-10B以及永生化的正常鼻咽上皮细胞NP69为中南大学湘雅医院和中山大学肿瘤防治中心赠送。实验方法和观察指标：采用免疫蛋白印迹法（Western Blot）和实时荧光定量反转录聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）分别检测鼻咽癌组织和正常鼻咽部黏膜组织中SIRT1蛋白和mRNA水平。后续实验选取CNE2为实验的主要细胞，通过CCK8试剂盒检测细胞活力，利用划痕实验和Transwell系统检测细胞迁移能力。采用裸鼠异体肿瘤模型研究SIRT1抑制剂Ex527对体内肿瘤生长的影响。通过油红和氟化硼二吡咯（Bodipy）染料标记细胞内脂滴。在机制研究方面，利用免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）和染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）分析SIRT1与缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）的相互作用。所有数据采用SPSS 26.0软件进行统计分析，以
P<0.05为差异具有统计学意义。
结果:NPC组织中SIRT1蛋白（1.005±0.168）和mRNA（5.829±2.395）水平均高于正常鼻咽黏膜组织（0.181±0.042、1.995±1.605），差异有统计学意义（
t值分别为6.438、2.759，
P值均<0.05）。NPC细胞系CNE1、CNE2、5-8F和6-10B中SIRT1的mRNA和蛋白水平也高于永生化的正常鼻咽上皮细胞NP69。SIRT1的过表达促进了NPC细胞的增殖和迁移能力。注射Ex527组的裸鼠成瘤能力低于对照组。SIRT1的低表达降低了NPC细胞脂质合成关键酶的蛋白表达水平，提高了脂质分解酶的蛋白表达水平，HIF-1α过表达促进了NPC细胞脂质合成酶的蛋白表达。SIRT1通过增强HIF-1α的去乙酰化水平抑制HIF-1α转录。HIF-1α与SIRT1启动子区域的结合能力在NPC细胞缺氧时下降。
结论:SIRT1促进NPC的增殖、迁移和脂质代谢，有望为预后判断和基因治疗提供新的参考。

关键词：沉默信息调节因子1、鼻咽癌、缺氧诱导因子1α、脂质代谢

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资助基金：国家自然科学基金81672682、81972554;江苏省科技项目BE2017680;江苏省研究生科研与实践创新计划项目SJCX190871、SJCX190872;National Natural Science Foundation of China81672682, 81972554;Jiangsu Science and Technology ProjectBE2017680;Postgraduate Research and Practice Innovation Program of Jiangsu ProvinceSJCX190871, SJCX190872

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：934-943