shRNA沉默NRP-1基因抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的体内外研究

摘要：

目的 构建靶向神经纤毛蛋白质1(Neuropilin-1,NRP-1)的短发卡RNA (shRNA)表达载体,观察NRP-1对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z细胞生长增殖的影响.通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果.方法 根据NRP-1 mRNA序列设计并构建3个靶向NPR-1基因,并含荧光素标记的shRNA真核表达载体(pSilencer-shRNA1、pSilencer-shRNA2和pSilencer-shRNA3);以脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将shRNA表达质粒转导入CNE-2Z细胞及裸鼠瘤体内,于激光共聚焦荧光显微镜观察shRNA转染表达情况;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性;实时定量PCR(RT-PCR)检测NRP-1基因在mRNA水平表达的抑制作用;Western印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果.体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 质粒成功转染CNE-2Z细胞及瘤体,可见大量的癌细胞表达绿色荧光.MTT实验证明NRP-1 shRNA抑制CNE-2Z细胞的生长增殖;RT-PCR结果表明NP-1的mRNA表达降低;Western印迹法结果验证目的基因蛋白同时表达下调;体内裸鼠成瘤实验证实转染6周后,转染组瘤体积生长较阴性对照组、空白对照组明显受到抑制”(0.599 ±0.002)比(1.141 ±0.013)、(1.165 ±0.308)cm3,均P＜0.05”,抑瘤率为48.6％.结论 表达shRNA的NRP-1基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外鼻咽癌细胞,沉默NRP-1基因能有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖.为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础.

关键词：神经纤毛蛋白质1、鼻咽肿瘤、短发夹RNA、基因治疗、裸鼠成瘤

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在线出版日期：2015-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：312-317