全长型脾酪氨酸激酶基因转染对喉癌细胞恶性生物学行为的抑制作用

摘要：

目的 探讨全长型脾酪氨酸激酶”full length spleen tyrosine kinase,Syk(L)”基因转染对喉癌细胞恶性生物学行为的抑制作用.方法 构建Syk(L)基因真核表达载体pIRES2-EGFP-Syk(L),测序验证正确后,用脂质体介导法及G418筛选法,分别建立转染pIRES2-EGFP-Syk (L)载体和pIRES2-EGFP空白载体的喉癌细胞系Hep-2-Syk (L)及Hep-2-neo细胞.实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time fluorescence polymerase chain reaction,Q-RT-PCR)及蛋白印迹法(Western Blot)分析转染细胞Hep-2-Syk (L)、Hep-2-neo及未转染细胞Hep-2的Syk (L) mRNA及蛋白表达水平;采用CCK-8实验、Transwell实验、裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞及未转染细胞的体外增殖能力、侵袭能力、体内成瘤能力.采用SPSS 18.0统计软件中的方差分析进行组间样本均数的比较.结果 成功构建了Syk(L)基因真核表达载体pIRES2-EGFP-SyK (L);成功建立分别稳定转染pIRES2-EGFP-Syk(L)载体、pIRES2-EGFP空白载体的Hep-2-Syk(L)、Hep-2-neo细胞系;Q-RT-PCR结果显示Hep-2-Syk(L)细胞Syk (L) mRNA表达水平明显高于Hep-2-neo及Hep-2细胞(相对表达量2-△△CT分别为28.395±0.067、3.891±0.021及1.005 ±0.012),差异有统计学意义(F=104.02,P＜0.01);Western Blot结果提示Hep-2-Syk(L)细胞Syk(L)相对蛋白含量为(0.821 ±0.047),明显高于Hep-2-neo细胞的(0.558 ±0.031)和Hep-2细胞的(0.468±0.031),差异有统计学意义(F=112.32,P＜0.01);CCK-8实验72 h Hep-2-Syk(L)细胞的平均吸光度值为1.390±0.067,低于Hep-2-neo细胞的1.830±0.067和Hep-2细胞的1.920±0.040,差异有统计学意义(F=107.64,P＜0.01);Transwell实验中,Hep-2-Syk(L)组每个视野的平均侵袭细胞数目为(176.04±22.32)个,较Hep-2-neo组的(301.02±21.45)个、Hep-2组的(336.04±26.01)个明显减少,差异有统计学意义(F=123.46,P＜0.01);裸鼠成瘤实验中,Hep-2-Syk(L)细胞组体内移植瘤生长受到抑制,平均体积为(250.77±34.83) mm3,低于Hep-2-neo组的肿瘤平均体积(750.77±40.83) mm3及Hep-2组的肿瘤平均体积(770.77±30.83) mm3差异有统计学意义(F=165.78,P＜0.01).结论 喉癌细胞中Syk(L)低表达与细胞的恶性生物学行为相关,通过基因转染技术提高Syk(L)表达可以抑制喉癌细胞的恶性生物学行为,Syk(L)可能成为喉鳞癌基因治疗良好的干预靶点.

关键词：喉肿瘤、蛋白酪氨酸激酶类、转染、细胞系,肿瘤

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资助基金：台州市科技计划项目2009KYB241;浙江省中医药科学研究基金计划2013ZA132

在线出版日期：2014-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：943-949