慢病毒介导的类表皮生长因子域7基因沉默抑制喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的研究

摘要：

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)重组慢病毒介导的类表皮生长因子域7(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)基因沉默对体外培养喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭潜能的影响.方法 采用RNA干扰技术,构建靶向EGFL7的shRNA重组慢病毒并转染Hep-2细胞,通过Real-timePCR和Western blot在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果;实验分为空白对照组(NC)、空白慢病毒感染组(Lenti-NC)和EGFL7基因沉默慢病毒感染组(Lenti-EGFL7),采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力.结果 Real-time PCR检测说明Lenti-EGFL7组mRNA相对表达量较NC组下降达94％(P＜0.001),Western blot检测证实Lenti-EGFL7组EGFL7蛋白相对表达量为(0.07 ±0.04)较NC组的(0.39 ±0.12)明显减低(P ＜0.001),表明成功构建稳定沉默EGFL7基因的喉癌Hep-2细胞株.CCK-8细胞增殖实验说明靶向沉默EGFL7表达导致喉癌细胞增殖明显抑制(P＜0.01),流式细胞术检测证实,与NC组和Lenti-NC组相比,Lenti-EGFL7组S期细胞百分比明显升高(P＜0.01),G1期细胞百分比下降(P＜0.05),细胞凋亡检测证实Lenti-EGFL7组细胞凋亡率为(66.2±1.28)％较NC组的(6.09±3.28)％和Lenti-NC组的(9.86±2.13)％明显增加(P ＜0.001).Transwell侵袭实验发现Lenti-EGFL7组穿过Matrigel到达下室的平均细胞数较NC组和Lenti-NC组均明显减少(P＜0.01).结论 靶向沉默EGFL7基因能抑制体外培养喉癌Hep-2细胞的增殖并降低细胞侵袭能力.

关键词：RNA,小分子干扰、喉肿瘤、表皮生长因子、细胞增殖、肿瘤侵润、慢病毒属、肿瘤细胞,培养的

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资助基金：高校基本科研业务费中山大学青年教师培育计划11ykpy43;广东省自然科学基金博士启动项目S2012040006622

在线出版日期：2014-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：643-648