shRNA沉默APE/Ref1对体外培养大鼠耳蜗螺旋神经节细胞过氧化氢损伤的影响

摘要：

目的 通过转染pGenesil-APE/Ref1-shRNA抑制体外培养大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)中无嘌呤无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factor 1,APE/Ref1)的表达,观察SGC在过氧化氢(H2O2)所致氧化应激环境中的活性及凋亡情况,探讨APE/Ref1在SGC抗氧化损伤过程中的作用.方法 体外培养大鼠SGC,加入pGenesil-APE/Ref1-shRNA转染72 h,更换培养基后加入不同浓度的H2O2 (0、10、25、50、100、300μmol/L)干预1h,更换正常培养基后继续培养24h.通过免疫印迹、分光光度检测法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、四甲基偶氮唑蓝法(MTT)分别检测SGC APE/Refl、磷酸化组蛋白H2AX的表达、caspase3活性、细胞活性以及凋亡情况.结果 pGenesil-APE/Ref1-shRNA能明显抑制APE/Ref1的表达,H2O2损伤浓度在50 ～ 300 μmol/L时,与对照组相比,pGenesil-APE/Ref1-shRNA组磷酸化组蛋白H2AX表达增加,caspase 3活性增加,细胞凋亡率增高,细胞活性降低,差异具有统计学意义(P值均＜0.05).结论 pGenesil-APE/Ref1-shRNA抑制APE/Refl表达后,大鼠体外培养SGC抗氧化损伤能力降低;APE/Ref1可能通过DNA修复功能,实现对SGC的保护作用.

关键词：螺旋神经节、RNA,小分子干扰、DNA-(无嘌呤或无嘧啶位点)裂合酶、氧化性应激、过氧化氢

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在线出版日期：2014-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：145-150