人鼻息肉上皮细胞的气液界面培养

摘要：

目的 气液界面培养人鼻腔纤毛上皮细胞,为深入研究鼻腔黏液纤毛传输系统提供良好的细胞模型.方法 采用低温酶消化法,气液界面培养人鼻腔纤毛上皮细胞,倒置相差显微镜观察细胞生长状况,扫描电镜和免疫细胞化学法观察细胞增殖、融合及分化情况,高速数字显微视频成像系统检测纤毛摆动频率及对外源性刺激剂三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的反应性.采用Prism 4.0软件进行数据分析.结果 光镜下Transwell支持膜上细胞24 h贴壁生长良好,浸没培养约1周后,单层细胞融合达80％～ 90％,细胞间衔接紧密成铺路石状结构,此时建立气液界面培养.气液界面培养7d,扫描电镜可见鼻腔上皮细胞表面覆盖纤毛或微绒毛,纤毛细胞分化良好,成簇状分布,杯状细胞及无纤毛柱状上皮细胞相间排列.气液界面培养14 d,Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ),闭合小环蛋白-1 (Zona occludens-1,ZO-1)免疫荧光结果显示细胞融合及纤毛上皮细胞分化良好,纤毛细胞比例可达50％～60％.气液界面培养7、14、21、28、35 d,上皮细胞纤毛摆动基础频率分别为(8.42±1.24)、(8.71±1.11)、(9.17±1.11)、(8.89±0.91)、(8.99 ±0.91) Hz,差异无统计学意义(F=1.451,P＞0.05).外源性刺激剂100 μmol/L ATP可明显增加纤毛摆动频率.结论 低温酶消化法,气液界面培养模式下可获得分化良好的人鼻腔纤毛上皮细胞,其形态和功能与体内接近,且能较长时间维持其正常形态及功能,可以为深入研究黏液纤毛传输系统提供细胞分化模型.

关键词：细胞培养技术、纤毛、上皮细胞、鼻腔、鼻息肉

所属期刊栏目：49

分类号：R765.25;R318;R285.5

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;北京市自然科学基金重点项目;北京市科技新星计划;高等学校博士学科点专项科研基金;卫生部公益性行业科研专项;北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划工程学科带头人项目

在线出版日期：2014-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：49-53