实时荧光定量聚合酶链反应测定表皮生长因子Ⅲ突变体表达的方法构建及其应用

摘要：

目的 构建含有表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variantⅢ,EGFRv Ⅲ)的重组质粒,建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术测定EGFRv Ⅲ的标准曲线,以定量检测喉鳞癌组织中EGFRv Ⅲ的表达水平.方法以重叠延伸PCR法构建含EGFR第1外显子及第8至部分第9外显子的融合序列.再以融合序列为模板,以高特异性的引物扩增EGFRv Ⅲ的目的片段,构建含有EGFRv Ⅲ的重组质粒,进行测序鉴定.将此质粒作为标准品进行梯度稀释,以TaqMan探针实时荧光定量PCR进行检测,建立标准曲线.并以此技术对32例喉鳞癌组织中EGFRvⅢ mRNA表达水平进行测定.结果 经测序鉴定,含EGFRv Ⅲ的重组质粒标准品构建成功,以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增所得的标准曲线,可用于EGFRv Ⅲ定量分析.32例喉鳞癌组织中共有5例检测到EGFRv Ⅲ的表达,阳性率为15.6%.除1例癌旁组织中存在极少量的EGFRv Ⅲ表达外,EGFRv Ⅲ均在肿瘤组织中表达.结论 用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术定量研究EGFRv Ⅲ的方法已构建成功,在喉癌组织中的成功运用已证明该方法切实可行,并且较为准确可靠.EGFRv Ⅲ在喉癌组织中有表达,但是阳性率及含量不高,是否能成为喉癌生物治疗的特异性攻击靶点尚待进一步探索.

关键词：受体、表皮生长因子、质粒、聚合酶链反应、喉肿瘤、癌、鳞状细胞

所属期刊栏目：43

分类号：R76(耳鼻咽喉科学)

资助基金：浙江省科技厅资助项目2003C33009

在线出版日期：2008-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：296-301