Cas9稳定表达人肿瘤细胞株的建立及其基因编辑活性

摘要：

目的：建立多种Cas9蛋白稳定表达的人肿瘤细胞株，验证细胞中Cas9的基因编辑活性，方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的人肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛选的方式建立Cas9稳定表达的细胞株；在其中3个细胞株中瞬时转入靶向TSC22基因的向导RNA，挑选单克隆，通过基因组PCR、测序及Western blot检测Cas9蛋白的基因编辑活性。结果筛选得到了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，瞬时转入向导RNA后成功造成了细胞中TSC22基因的大片段缺失。结论成功建立了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。这些细胞株在大规模药物筛选、新药作用靶点的筛选以及基因功能研究等方面有潜在应用价值。

关键词：细胞系、肿瘤、基因编辑

所属期刊栏目：46

分类号：R73;R28

资助基金：国家科技基础条件平台资助项目NSTI-CR15

在线出版日期：2017-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：43-48