沉默CD147基因对人甲状腺髓样癌TT细胞相关蛋白表达和生物学特性的影响

摘要：

目的 探讨沉默CD147基因对人甲状腺髓样癌TT细胞ANXA2、基质金属蛋白酶(MMP)-2和组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-2蛋白表达和生物学特性的影响.方法 首先用免疫细胞化学技术检测CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2等蛋白在TT细胞中的表达情况；应用RNA干扰(RNAi)技术筛选出能有效沉默TT细胞CD147基因的小干扰RNA(siRNA)序列和最佳时间点；在最佳时间点,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测ANXA2、MMP-2、TIMP-2等在mRNA和蛋白水平的表达情况；四甲基偶氮唑盐法检测CD147基因沉默后TT细胞的增殖情况；流式细胞技术检测CD147基因被沉默后各实验组TT细胞的周期和凋亡的改变；Transwell小室实验检测沉默CD147基因对TT细胞迁移和侵袭的影响.结果 CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2等蛋白在TF细胞中均有不同程度的表达；筛选出2条能够在72 h时有效沉默TT细胞CD147基因表达的siRNA序列；MMP-2 mRNA和蛋白的相对表达量也同时下降；而ANXA2 mRNA和蛋白的相对表达量均无明显变化:TIMP-2 mRNA相对表达量无变化,但其蛋白的表达水平明显下降；沉默CD147基因后TT细胞的增殖受到抑制,Go/G1期细胞明显增加,G2/M期细胞比例明显下降,但各实验组凋亡细胞的比例没有变化；沉默TT细胞CD147基因后,Transwell小室迁移和侵袭实验中,各实验组的穿膜细胞数差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 通过RNAi技术,2条CD147 siRNA可以有效的沉默TT细胞CD147基因在mRNA和蛋白水平上的表达,同时下调MMP-2 mRNA和蛋白的表达,对TIMP-2 mRNA无明显影响,但是导致了TIMP-2蛋白表达下降,对ANXA2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响；沉默CD147基因可以抑制TT细胞的生长,改变其细胞周期,但是对TT细胞的凋亡、迁移和侵袭影响不大.

关键词：甲状腺肿瘤、癌,髓样、细胞系,肿瘤、基质金属蛋白酶类

所属期刊栏目：43

资助基金：河南省基础与前沿技术研究项目112300410155

在线出版日期：2014-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：103-108