myocardin基因沉默在PDGF-BB诱导小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化中的作用

摘要：

目的 构建myocardin特异性siRNA真核表达载体,体外观察其对myocardin基因的沉默效应及对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向平滑肌样细胞分化过程中的影响.方法 培养小鼠骨髓问充质干细胞并利用血小板源生长因子(PDGF-BB,50 mg/L)联合高浓度胎牛血清(20%FBS)诱导其向平滑肌样细胞分化;构建含U6启动子和myocardin特异短发卡RNA(shRNA)编码序列的质粒载体pGen-myo-shRNA,以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil-Con(pCon)为阴性对照,分别转染诱导培养后第6天的小鼠MSC,48 h后用RT-PCR技术检测细胞内myocardin在mRNA水平的表达;同时用免疫组织化学方法 检测平滑肌肌球蛋白重链(sM myosin heavy chain,SM-MHC)的表达来鉴定平滑肌样细胞的分化.结果 成功构建myocardin特异性siRNA真核表达载体,利用其沉默myocardin基因后,干扰组相比空白对照组myocardin mRNA表达下调42.86%,差异有统计学意义(P<O.01);且免疫组织化学结果 表明:干扰组SM-MHC阳性表达低于空白对照组(P<0.01).结论 小鼠骨髓间充质干细胞中存在少数细胞具有分化成为平滑肌样细胞的潜能;构建的pGen-myo-shRNA重组质粒能有效抑制myocardin基因的表达,且对小鼠骨髓问充质干细胞向平滑肌样细胞分化有抑制作用.

关键词：间质干细胞、RNA、小分子干扰、肌细胞、平滑肌

所属期刊栏目：38

分类号：R6(外科学)

资助基金：国家自然科学基金30570725

在线出版日期：2009-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：117-120