增殖细胞核抗原短发夹状RNA对人骨肉瘤细胞生长的影响

摘要：

目的构建增殖细胞核抗原(PCNA)短发夹状RNA表达载体,检测其对人骨肉瘤细胞PCNA表达、细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法体外构建PCNA shRNA 表达载体pSilence2.1-neo-PCNA,转染人骨肉瘤细胞系MG-63,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后PCNA mRNA表达,免疫组织化学(SP)法检测转染前后PCNA 蛋白的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及克隆形成试验检测细胞增殖活性,3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)细胞掺入试验检测细胞DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙染色法检测细胞凋亡情况.结果 pSilence2.1-neo -PCNA载体转染能显著抑制PCNA mRNA及蛋白的表达,转染后mRNA表达抑制率为80.51%﹑增殖指数值为空白组的25.68%.转染组48 h细胞增殖抑制率为61.78%,转染组3H-TdR掺入率明显低于空白组(P<0.01).细胞周期分析显示,siRNA转染组G0G1期细胞含量显著增加,而S期细胞含量显著减低.转染组凋亡率为16.54%. 结论 pSilence2.1-neo-PCNA可显著抑制MG-63细胞PCNA 的表达及细胞增殖活性,促进细胞凋亡.

关键词：增殖细胞核抗原、RNA、免疫组织化学、骨肉瘤

所属期刊栏目：34

分类号：R73;R33

在线出版日期：2005-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：167-170