神经调节素1β通过激活Sirt1信号通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

摘要：

目的 探讨神经调节素1β(neuregulin 1β,NRG1β)是否通过抑制自噬减轻大鼠大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R)损伤,以及对沉默信息调节因子1(silent information regulator protein 1,Sirt1)信号通路的影响.方法 将210只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、治疗组(NRG1β组)、激动剂组(SRT501组)、激动剂+治疗组(SRT501+NRG1β组)、抑制剂组(EX527组)和抑制剂+治疗组(EX527+NRG1β组),每组30只.采用改良线栓法建立MCAO/R模型,线栓由颈外动脉插入颈内动脉18～22?mm,堵塞左侧大脑中动脉起始部.缺血2?h后,缓慢拔出线栓,恢复脑血流22?h.EX527(5?mg/kg)、SRT501(100?mg/kg)于术前30?min腹腔注射,NRG1β(2?μg/kg)于拔出线栓后由微量注射器注入颈内动脉.脑缺血2?h、再灌注22?h后采用改良神经损伤严重程度评分(modified neurological severity score,mNSS)法评价各组大鼠的神经行为功能,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法计算大鼠脑梗死体积比例,苏木精-伊红染色观察神经元形态变化,免疫印迹(western blot,WB)和免疫荧光(immunofluorescence,IF)法分别检测额叶皮质缺血半暗带(ischemic penumbra,IP)区Sirt1、LC3、P62蛋白的表达和阳性细胞指数(positive cell index,PCI).结果 NRG1β组大鼠的mNSS[(10.0±0.8)分vs.(12.8±0.6)分,P<0.001]和脑梗死体积比例[(23.78％±3.52％)vs.(40.24％±1.55％),P<0.001]均优于MCAO/R组,差异具有统计学意义;与MCAO/R组比较,NRG1β组、SRT501组、SRT501+NRG1β组mNSS均有不同程度下降、脑梗死体积比例缩小;各组中SRT501+NRG1β组mNSS最低、脑梗死体积比例最小,EX527组mNSS最高、脑梗死体积比例最大.苏木精-伊红染色显示,NRG1β组大鼠的神经元形态结构损伤较MCAO/R组、EX527组有所改善.WB结果显示,NRG1β组Sirt1表达[(0.81±0.01)vs.(0.67±0.02),P<0.001]和P62表达[(0.92±0.01)vs.(0.78±0.02),P<0.001]均高于MCAO/R组,LC3表达[(0.49±0.02)vs.(0.94±0.03),P<0.001]低于MCAO/R组.IF结果显示,NRG1β组Sirt1 PCI[(0.67±0.01)vs.(0.52±0.02),P<0.001]和P62 PCI[(0.52±0.02)vs.(0.37±0.01),P<0.001]均高于MCAO/R组,LC3 PCI[(0.38±0.01)vs.(0.50±0.01),P<0.001]低于MCAO/R组.WB和IF检测显示,Sirt1与P62表达趋势一致,NRG1β组、SRT501组与SRT501+NRG1β组表达高于MCAO/R组,各组中SRT501+NRG1β组表达最高、EX527组表达最低;LC3蛋白表达趋势与Sirt1、P62相反,在NRG1β组、SRT501组与SRT501+NRG1β组表达较MCAO/R组低;各组中SRT501+NRG1β组表达最低、EX527组表达最高.结论 NRG1β可通过激活MCAO/R损伤大鼠Sirt1信号通路抑制自噬发挥神经保护作用.

关键词：脑缺血再灌注损伤、神经调节素1β、大鼠、自噬、Sirt1信号通路

所属期刊栏目：18

分类号：R289.5;R743.31;R-332

在线出版日期：2023-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共14页

页码：301-314