炎性因子对星形胶质细胞的活化及sPLA2-ⅡA表达的机制及影响

摘要：

目的 探索在炎性因子作用下,星形胶质细胞的活性变化及其产生的分泌型磷脂酶A2-ⅡA (secretory phospholipase A2 of group ⅡA,sPLA2-ⅡA)表达量的变化,进一步探讨其可能存在的机制.方法 在体外原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞的基础上,取第4代培养的细胞用于实验.随机分为对照组和实验组,实验组分别为:10?ng/ml白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)组,100?ng/ml IL-1β组,10?ng/ml肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)组,100?ng/ml TNF-α组,10?ng/ml IL-1β+10?ng/ml TNF-α组,100?ng/ml IL-1β+100?ng/ml TNF-α组.24?h后用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞活力.选取10?ng/ml IL-1β+10?ng/ml TNF-α组继续进行实验.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附测定,检测sPLA2-ⅡA的表达量变化,并通过qRT-PCR检测核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、NF-κB抑制蛋白激酶α(inhibitor of NF-κB kinase α,IKKα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(inhibitor of NF-κB kinase β,IKKβ)的mRNA变化.结果 通过分离、纯化获得了形态典型的大鼠大脑皮质星形胶质细胞,细胞形态不规则,突起较多较长,呈放射状.胶质纤维酸性蛋白免疫染色显示纯度达95%以上.实验组细胞的活性均高于对照组.其中,100?ng/ml IL-1β组、100?ng/ml TNF-α组、10?ng/ml IL-1β+10?ng/ml TNF-α组和100?ng/ml IL-1β+100?ng/ml TNF-α组的细胞活性明显高于对照组(t=0.07、0.12、0.53、0.39,P＜0.05).与对照组相比,10?ng/ml IL-1β+10?ng/ml TNF-α组sPLA2-ⅡA的mRNA和蛋白水平表达量显著升高(t=9.615、11.635,P＜0.05),NF-κB、IKKα、IKKβ的mRNA均增高(t=4.015、4.719、6.509,P＜0.05).结论 炎性因子IL-1β与TNF-α联合应用可刺激星形胶质细胞活化,并能够不同程度地刺激sPLA2-ⅡA的表达,该过程可能与NF-κB通路有关.

关键词：星形胶质细胞、炎性因子、分泌型磷脂酶A2-ⅡA

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资助基金：国家自然科学基金资助项目81171097, 81271312

在线出版日期：2018-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1012-1018