基于TLR4/NF-κB通路研究桃叶珊瑚苷联合ADSCs-exos对TBHP诱导的髓核细胞保护作用

摘要：

该文研究桃叶珊瑚苷(aucubin)协同脂肪间充干细胞外泌体(adipose-derived stem cells-exosomes,ADSCs-exos)对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的人源髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)炎性损伤、衰老及凋亡的保护作用及机制.将TBHP诱导NPCs分为正常组、模型组、aucubin组、ADSCs-exos组及aucubin+ADSCs-exos组.细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖,细胞染色-β-半乳糖苷酶活性染色方法(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immu-nosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)炎症因子的表达,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原α1(collagen type Ⅱ alpha 1,COL2A1)、Toll 样受体 4(Toll-like recep-tor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的mRNA和蛋白表达情况.结果显示,与模型组比较,aucubin或ADSCs-exos组NPCs活性和增殖上升,G0/G1 期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增加,凋亡减少,细胞衰老比例降低,IL-1β和TNF-α水平下降,TLR4 和NF-κB mRNA及蛋白表达显著减少,IL-10 水平上升,aggrecan和COL2A1 mRNA及蛋白表达均升高;与aucubin或ADSCs-exos单独处理组比较,aucubin+ADSCs-exos组NPCs活性和增殖进一步上升,G0/G1 期细胞比例进一步降低,S期细胞比例进一步增加,凋亡水平和细胞衰老比例都进一步降低,IL-1β和TNF-α水平,TLR4 及NF-κB mRNA和蛋白表达水平均进一步下降,而IL-10 和aggrecan、COL2A1 mRNA及蛋白水平均进一步上升.综上所述,aucubin和ADSCs-exos均能通过抑制炎症反应,减少NPCs凋亡和衰老,促进细胞活性、增殖以及细胞外基质(ECM)的合成而发挥保护作用,其作用机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,而两者联合应用,可以对保护作用起协同增效的作用.

关键词：脂肪间充干细胞外泌体、髓核细胞、桃叶珊瑚苷、TLR4/NF-κB信号通路

所属期刊栏目：48

分类号：R734.2;R285.5;R965.2

资助基金：国家自然科学基金;湖南省自然科学基金项目;长沙市自然科学基金项目;湖南省卫生健康委员会课题;湖南省中医药管理局科研项目;湖南省研究生科研创新课题

在线出版日期：2023-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：5294-5303