二仙汤含药血清通过BK通道对H2O2诱导的MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

摘要：

探讨二仙汤(Erxian Decoction,EXD)含药血清通过BK通道(BK channel)对氧化应激的MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响.构建H2O2诱导MC3T3-E1细胞氧化应激模型,使用3 mmol·L-1的氯化四乙基铵(tetraethylamine chloride,TEA)阻断MC3T3-E1细胞BK通道.将MC3T3-E1细胞分为对照(control)组、模型(model)组、EXD组、TEA组和TEA+EXD组.MC3T3-E1细胞按照分组分别处理2 d后,加入700μmol·L-1 H2O2继续培养2 h,CCK-8法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒法检测细胞ALP活力,蛋白免疫印迹法检测细胞蛋白表达,实时荧光定量PCR检测细胞mRNA表达,茜素红染色法检测成骨细胞矿化区域.结果显示,与control组相比,model组细胞增殖活性和ALP活力显著降低,BK通道α亚基(BK channelαsubunit,BKα)、一型胶原(collagenⅠ,COL1)、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和磷酸化丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)表达水平下降,Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、BMP2和OPG mRNA表达水平降低,钙结节面积显著缩小;EXD含药血清干预可以显著提高细胞增殖活性和ALP活力,上调BKα、COL1、BMP2、OPG和磷酸化的Akt、叉头框转录因子O亚族1(forkhead box protein O1,FoxO1)蛋白表达,促进RUNX2、BMP2和OPG mRNA表达,增大钙结节面积;而TEA阻断BK通道后,EXD含药血清促进BKα、COL1、BMP2、OPG和磷酸化Akt、FoxO1蛋白表达,提高RUNX2、BMP2和OPG mRNA表达,增大钙结节面积的作用被逆转.EXD含药血清能改善氧化应激的MC3T3-E1细胞增殖活性、成骨分化和矿化能力,其机制与调控BK通道以及下游Akt/FoxO1信号通路有关.

关键词：二仙汤、氧化应激、BK通道、成骨细胞、成骨分化、骨形成

所属期刊栏目：48

分类号：R782.2;R318;Q813

资助基金：国家自然科学基金;江西省自然科学基金;江西中医药大学校级科技创新团队发展计划项目;江西中医药大学校级研究生创新基金项目

在线出版日期：2023-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2522-2529