10.19540/j.cnki.cjcmm.20230112.301
基于LKB1-AMPK通路及16S rDNA测序技术研究"新建曲"发酵炮制前后降脂功效差异及作用机制
在建立新建曲处方,明确发酵炮制升高新建曲降脂有效成分含量的基础上,进一步比较发酵炮制前后新建曲降脂作用差异,研究新建曲治疗高脂血症的作用机制.随机将70 只SD大鼠分为7 组,包括正常组、模型组、阳性药辛伐他汀组(0.02 g·kg-1)、发酵前新建曲低高剂量组(1.6、8 g·kg-1)、新建曲发酵品低高剂量组(1.6、8 g·kg-1),每组10 只,连续给予高脂饲料6周,建立高脂血症(hyperlipidemia,HLP)模型.造模成功后,继续给予高脂饲料并灌胃对应药物 6 周,每天 1 次,对比新建曲发酵炮制前后对高脂血症大鼠体质量、肝脏系数、小肠推进率的影响.采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)检测新建曲发酵前后对高脂血症大鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、胃动素(motilin,MTL)、胃泌素(gastrin,GAS)、Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATPase,Na+-K+-ATP)、水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP-2)水平的影响;通过苏木素-伊红(hemoxylin eosin,HE)染色法和油红O脂肪染色法研究新建曲对HLP大鼠肝脏组织形态的影响;采用免疫组化检测新建曲对肝脏组织中激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化 AMPK(p-AMPK)、肝激酶B1(LKB1)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)蛋白表达的影响;基于 16S rDNA高通量测序技术研究新建曲对HLP大鼠肠道菌群结构的调节作用.研究结果显示,与正常组相比,模型组大鼠体质量、肝脏系数显著升高(P＜0.01),小肠推进率显著下降(P＜0.01),血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST、BUN、Cr、AQP2 水平显著升高(P＜0.01),血清中HDL-C、MTL、GAS、Na+-K+-ATP水平显著降低(P＜0.01),大鼠肝脏中AMPK、p-AMPK、LKB1 蛋白表达显著降低(P＜0.01),HMGCR蛋白表达显著升高(P＜0.01),此外,模型组大鼠粪便菌群中observed_otus、Shannon、Chao1 指数显著降低(P＜0.05 或P＜0.01),降低了厚壁菌门相对丰度,增加了疣微菌门、变形菌门相对丰度,且Ligilactobacillus、Lachnospiraceae_NK4A136_group等有益菌属相对丰度降低;与模型组相比,新建曲发酵前后各组均可显著调节HLP大鼠的体质量、肝脏系数及小肠推进率指数(P＜0.05 或P＜0.01),可降低HLP 大鼠血清中 TC、TG、LDL-C、ALT、AST、BUN、Cr、AQP2 水平,同时升高血清中 HDL-C、MTL、GAS、Na+-K+-ATP水平,能有所改善 HLP 大鼠肝脏形态并增加肝脏中 AMPK、p-AMPK、LKB1 蛋白表达灰度值,降低HMGCR蛋白表达值,且可以调节HLP大鼠肠道菌群结构,observed_otus、Shannon、Chao1 指数升高,厚壁菌门、Ligilactobacillus(属)、Lachnospiraceae_NK4A136_group(属)的相对丰度增加;其中以新建曲发酵品高剂量组对HLP大鼠体质量、肝脏系数、小肠推进率、血清指标水平作用显著(P＜0.01),效果优于发酵前新建曲.以上结果表明,新建曲可改善HLP大鼠的血脂水平、肝肾功能及胃肠动力,且新建曲发酵炮制后对高脂血症的改善作用显著增强,其机制可能与LKB1-AMPK通路中 AMPK、p-AMPK、LKB1、HMGCR蛋白及调节肠道菌群结构有关.
发酵、炮制、高脂血症、LKB1-AMPK通路、肠道菌群
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Q523;Q959.837;R285.5
河南省高等学校重点科研项目;国家重点研发计划;国家公益性行业科研专项;河南中医药大学博士基金;河南省本科高校省级大学生创新创业训练计划项目
2023-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共14页
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