甲基阿魏酸通过microRNA-378b介导CaMKK2-AMPK通路改善乙醇诱导的L02细胞脂肪变性

摘要：

酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD),随着其发病率和病死率的不断上升,已严重且广泛地影响着全世界人民的健康.甲基阿魏酸(methyl ferulic acid,MFA)在前期已被证实可通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号显著抑制乙醇诱导的L02细胞内脂质生成,但深层作用机制尚不清楚.该研究旨在现有基础上,进一步阐明MFA可通过microRNA-378b(miR-378b)介导钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2,CaMKK2)-AMPK信号通路改善乙醇诱导的L02细胞脂质积累的机制.通过100 mmol·L-1乙醇诱导L02细胞48 h建立体外ALD模型,并给予不同浓度(100、50、25μmol·L-1)的MFA处理.采用电穿孔法将miR-378b质粒(含过表达质粒-miR-378b mimics、沉默质粒-miR-378b inhibitor及各自的阴性对照-miR-378b NCs)转染进L02肝细胞以上调或下调细胞中miR-378b水平.采用市售诊断试剂盒和全自动生化分析仪检测细胞中胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平.采用定量实时聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测L02细胞中miR-378b的表达水平,采用PCR检测CaMKK2 mRNA水平,采用Western blot检测脂质代谢过程中参与脂质合成、分解和转运的相关因子的蛋白表达.结果显示乙醇能显著诱导细胞内TG、TC水平的上升,而MFA则能显著降低TG、TC水平.乙醇使miR-378b的水平急剧上调,而MFA有效地抑制了miR-378b水平.miR-378b过表达刺激了乙醇诱导的L02细胞中的脂质积累,miR-378b沉默改善了乙醇诱导的脂质沉积,而MFA通过降低miR-378b来激活CaMKK2-AMPK信号通路,调节脂质合成、分解与转运,从而改善L02细胞内脂代谢紊乱.实验结果表明,MFA通过miR-378b调控CaMKK2-AMPK通路改善L02细胞内脂质沉积.

关键词：甲基阿魏酸、miR-378b、CaMKK2、肝脂积累、酒精性肝病

所属期刊栏目：48

分类号：R575.5;R361.3;R285.5

资助基金：广西壮族自治区重点研究课题;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：193-201