迷迭香酸通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的机制研究

摘要：

探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)通过上调线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的具体分子机制.将巨噬细胞RAW264.7用不同浓度的迷迭香酸预处理后感染金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus,提取细胞总RNA和总蛋白,利用q-PCR和Western blot法分别检测磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)转录水平和蛋白表达的变化;使用线粒体分离试剂盒分离巨噬细胞线粒体,结合Western blot法检测E3泛素-蛋白连接酶Parkin在线粒体的募集情况及其磷酸化水平的变化;综合运用免疫共沉淀和激光共聚焦显微技术观察PINK1和Parkin在细胞内的共定位情况并观察迷迭香酸对PINK1/Parkin相互作用的影响;利用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1(mitochondrial division inhibitor 1)预处理、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲除技术以及细菌平板计数,检测炎症细胞因子水平和胞内杀菌能力,确证迷迭香酸可以通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫.结果显示,迷迭香酸可显著上调PINK1转录和蛋白水平的表达,促进Parkin由细胞质向线粒体募集并增强其磷酸化水平,促进PINK1和Parkin的相互作用并增强其在巨噬细胞内的共定位;阻断线粒体自噬或敲除PINK1能显著抑制迷迭香酸对巨噬细胞抗菌免疫的促进作用.该研究表明,迷迭香酸通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬促进巨噬细胞抗菌固有免疫应答.

关键词：迷迭香酸、PINK1/Parkin、线粒体自噬、巨噬细胞、抗菌免疫

所属期刊栏目：47

分类号：R735.7;R285.5;TH164

资助基金：国家自然科学基金;江苏省研究生科研与实践创新计划项目

在线出版日期：2023-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：6450-6456