甜橙中UDP-鼠李糖合成酶基因CsRHM的克隆与鉴定

摘要：

UDP-鼠李糖是一种由鼠李糖合成酶(rhamnose synthase,RHM)催化合成的糖苷供体,是合成各种鼠李糖糖苷类次生代谢产物的重要组成之一.该研究从甜橙中首次克隆得到一个RHM基因(CsRHM),并进行生物学信息分析,体外功能鉴定等特异性分析.结果显示CsRHM的开放阅读框为2 007 bp,编码668个氨基酸,推测相对分子质量为75.27 kDa,理论等电点为6.97,具有RHM酶家族的特征信号序列(GxxGxxG/A和YxxxK).多序列对比与系统进化树显示,CsRHM与其他物种的RHM具有同源性.体外酶促反应结果证实CsRHM重组蛋白具有将UDP-葡萄糖转化为UDP-鼠李糖的催化活性,并且明确了其催化的酶动力学参数Vmax=0.373 7 μmol·L-1·min-1,Km=21.29 μmol·L-1,Kcat=0.24 s-1,Kcat/Km=1.13×104 s-1.L·mol-1.该研究首次报道了 CsRHM,并验证了其体外催化功能,为进一步研究生物合成UDP-鼠李糖奠定基础.

关键词：甜橙、鼠李糖合成酶、UDP-鼠李糖、功能鉴定、酶动力学

所属期刊栏目：47

分类号：Q93;R373;S852.65

资助基金：国家重点研发计划;中国中医科学院科技创新工程项目;中国中医科学院科技创新工程项目

在线出版日期：2022-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3208-3214