雷公藤甲素通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导卵巢颗粒细胞自噬的实验研究

摘要：

研究雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,OGCs)自噬所需的浓度、时间及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响.采用CCK-8法比较不同浓度的TP对原代培养大鼠OGCs的抑制作用并计算IC50;Western blot法检测不同浓度、时间点下TP对OGCs自噬相关因子蛋白表达的影响,同时检测TP、自噬诱导剂(brefeldin A)、PI3K/mTOR抑制剂(NVP-BEZ235)分别干预OGCs对PI3 K/AKT/mTOR通路及自噬相关因子蛋白表达的影响.结果 显示,不同浓度TP作用于大鼠OGCs的IC50为14.65μmol·L-1,其中最小抑制浓度为0.1 μmol· L-1(100 nmol· L-1);与空白对照组相比,各组beclin1,LC3Ⅱ蛋白表达水平均升高,LC3 Ⅰ及p62蛋白表达水平均下降,其中100 nmol·L-1 TP作用于大鼠OGCs 12 h,各指标变化显著(P＜0.05或P＜0.01);TP,brefeldin A,NVP-BEZ235分别处理大鼠OGCs 12 h后,与空白对照组相比,TP可显著促进下游自噬效应分子beclin1,LC3 Ⅱ蛋白表达水平并抑制LC3 Ⅰ,p62蛋白表达水平(P＜0.05或P＜0.01),且TP组beclin1和LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ的表达高于brefeldin A组,p62的表达低于brefeldin A组(P＜0.05或P＜0.01).同时,TP能显著抑制p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平,且TP抑制效果优于NVP-BEZ235组.因此,该研究提示100 nmol· L-1 TP作用于离体培养大鼠OGCs12 h,可成功诱导OGCs自噬;TP可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导OGCs自噬.

关键词：雷公藤甲素、卵巢颗粒细胞、自噬、PI3K/AKT/mTOR

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资助基金：国家自然科学基金项目;陕西中医药大学学科创新团队项目

在线出版日期：2020-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：3429-3434