杭菊黄酮醇合酶基因的原核表达与重组蛋白体外活性研究
从杭菊转录组数据库中筛选并通过RACE技术克隆出1条黄酮醇合酶基因(暂命名CmFLS),简单序列分析表明CmFLS基因全长1 235 bp,包含1个1 008 bp的开放阅读框(ORF),编码335个氨基酸.预测得到的CmFLS编码的蛋白相对分子质量为37.96 kDa,等电点(pI)为5.41,构建进化树发现CmFLS与菊科其他种植物同源性很高.利用原核表达技术成功诱导出大小43 kDa左右的重组融合蛋白,同时使用Ni-NTA树脂分离纯化出重组融合蛋白,并确定使用含250 mmol· L-咪唑的Ni-native buffer洗脱效果最好.将纯化后的重组融合蛋白进行体外催化反应,然后将反应的产物萃取后进行HPLC分析,结果显示CmFLS重组融合蛋白在特定缓冲液及反应条件下能够将二氢槲皮素催化生成槲皮素,表明CmFLS编码的功能性蛋白在杭菊黄酮生物合成途径中具有双加氧酶活性.以上研究结果为进一步研究CmFLS的功能、阐明FLS酶的功能机制奠定了基础,同时为从分子水平调控杭菊黄酮醇成分代谢及体外催化合成黄酮醇提供新思路.
杭菊、黄酮醇成酶、原核表达、蛋白活性
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国家自然科学基金青年基金项目81503180;中央高校基本科研业务费专项资金项目KJQN201643,KYZ201608
2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
3471-3476
