传统中药金钱草ISSR-PCR反应体系的正交优化研究

摘要：

建立稳定、可靠的金钱草ISSR-PCR反应体系,为金钱草遗传多样性分析、优良品种选育、药材分子鉴定奠定基础.该研究在7水平单因素实验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,应用SPSS 19.0进行方差分析,对影响反应体系的5个主要因素在4个水平上进行优化.利用优化的反应体系,筛选引物最适退火温度,以23份不同产地金钱草材料检测体系稳定性.结果显示模板DNA,引物,dNTP,Mg2,Taq酶5个因素对金钱草ISSR-PCR反应结果均有极显著影响,影响大小依次为引物＞ Taq酶＞模板DNA＞ Mg2+＞ dNTP,确定最优反应体系为总体积25μL,模板DNA 60 ng,引物0.3μmol·L-1,dNTP 0.2mmol·L-1,Mg2+1.8 mmol·L-1,Taq酶1.25 U.经不同产地样品检测,该优化体系稳定、可靠.该研究为其他物种ISSR-PCR体系的优化提供参考.

关键词：金钱草、正交设计、ISSR-PCR、体系优化

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在线出版日期：2014-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2233-2238