基于共转染的植物雌激素活性成分筛选方法的建立与应用

摘要：

目的:建立一种以共转染为基础的、高效灵敏的植物雌激素活性成分的细胞筛选方法,应用此方法研究鹰嘴豆提取部位的雌激素效应.方法:RT-PCR方法扩增人雌激素受体α(hERα)cDNA,并构建哺乳细胞表达载体pERα.将此载体与含有雌激素应答序列(3 ×ERE)的Luc报告基因载体(pERE-Luc)以不同比例共转染MCF-7细胞,比较不同比例下Luc的活力,确定最佳共转染比例.用芒柄花素、鹰嘴豆豆芽素A和染料木素等植物雌激素验证了该模型的灵敏性,并进一步测定了鹰嘴豆不同提取部位的Luc活力.结果:将pERα与pERE-Luc共转染MCF-7细胞,与pERE-Luc单转染相比,显著提高Luc的活力,且在10∶1( pERE-Luc∶ pERα)时活力最高,Luc活力提高了5倍.用此转染比例测定芒柄花素、鹰嘴豆豆芽素A和染料木素等植物雌激素Luc活力测定结果表明,共转染能诱导Luc的表达,且ER特异性抑制剂ICI 182,780能抑制其活性.利用此模型发现鹰嘴豆的70％乙醇总提取物、乙酸乙酯部位和石油醚部位均具有大量的雌激素活性物质.ICI 182,780能有效抑制其雌激素效应.结论:成功建立了一种共转染为基础的植物雌激素活性成分的筛选方法,该方法具有较高的特异性和灵敏性,可用于植物雌激素活性成分的筛选.

关键词：植物雌激素、共转染、虫荧光素酶、人雌激素受体α、鹰嘴豆

分类号：R286(中药学)

资助基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金2010211A58;中国科学院“西部之光”人才培养计划XBBS200819;创新团队国际合作伙伴计划项目092D301401

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2530-2534