淫羊藿、女贞子含药血清联合糖皮质激素影响雷帕霉素诱导ASMCs自噬激活的机制研究

摘要：

目的 研究淫羊藿女贞子含药血清合用地塞米松对自噬激活剂雷帕霉素(Rap)诱导的气道平滑肌细胞(ASMCs)自噬、凋亡及增殖活性的影响.方法 培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组,即正常组(正常大鼠血清)、Rap组(正常大鼠血清+Rap)、激素组(正常大鼠血清+地塞米松+Rap)、中药组(Rap+淫羊藿、女贞子含药血清)、合用组(Rap+淫羊藿、女贞子含药血清+地塞米松).根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入Rap刺激ASMCs,48 h后进行检测.电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达并评价细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡活性;Western blotting检测LC3蛋白相对表达;细胞免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Beclin-1、P53、Caspase-3、mTOR、p-mTOR蛋白表达.结果 激素可协同Rap诱导ASMCs自噬活性增加,使LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白比值进一步增加,下调p-mTOR表达,但对Beclin-1及mTOR表达无影响,抑制ASMCs细胞活力及增殖活性,可增加凋亡水平,上调Bax、Caspase-3及P53表达,下调Bcl-2表达.中药组及合用组均能显著抑制Rap诱导的ASMCs自噬,下调LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值及Beclin-1蛋白表达,并改善Rap导致的细胞活力、增殖活性降低.此外中药能抑制凋亡活性升高,上调Caspase-3蛋白表达,下调P53蛋白表达;中西药合用能下调p-mTOR蛋白表达,但对凋亡活性无显著影响.与激素单用比较,合用组下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,调节ASMCs细胞活力、增殖活性及凋亡活性均有统计学差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 中药联合糖皮质激素可抑制激素协同Rap诱导的ASMCs过度自噬状态,并改善被抑制的细胞活性,使ASMCs趋于正常.

关键词：气道平滑肌细胞、自噬、凋亡、淫羊藿、女贞子、糖皮质激素、雷帕霉素

所属期刊栏目：31

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;北京市自然科学基金资助项目

在线出版日期：2022-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1354-1357,1371