运用抑制性消减杂交技术构建糖尿病肾阳虚证DNA消减文库

摘要：

目的:运用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建糖尿病(Diabetic mellitus,DM)肾阳虚证DNA消减文库.方法:选择汉族中医辨证为肾阳虚证的DM患者以及正常人做对照组,进行正向和反向消减杂交.用Rsa Ⅰ酶切用硅胶法抽提基因组DNA成大小不等的片段,分别连接两种不同的接头,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U/A载体连接,经蓝白斑筛选及菌液PCR筛选出阳性重组质粒,构建DM肾阳虚证DNA消减文库.结果:用SSH方法筛选出DM肾阳虚证的差异DNA片段,经克隆及PCR筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DM肾阳虚证的DNA消减文库.结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DM肾阳虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DM肾阳虚证相关基因奠定了基础.

关键词：糖尿病、肾阳虚证、抑制性消减杂交、基因组消减文库

所属期刊栏目：12

分类号：R2-031

资助基金：中国科学院资助项目30271573,30472118;国家中医药管理局科研项目02-03JP43;广东省科技计划2003B31712

在线出版日期：2006-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：192-194