血必净注射液抑制肺泡巨噬细胞焦亡改善脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤

摘要：

目的 观察血必净注射液对脓毒症肺损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 ①体内实验:选择 42 只C57BL/6J雄性小鼠,按随机数字表法分为正常对照组(腹腔注射生理盐水)、脓毒症模型组[腹腔注射脂多糖(LPS),10 mg/kg]、血必净预处理组(于制模前腹腔注射血必净注射液 10 mL/kg),每组 14 只,其中10 只用于观察 7d内小鼠生存情况,另外 4 只用于其余指标检测.于制模后 16h取材,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血浆炎症因子白细胞介素(IL-6、IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;处死小鼠后取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肺组织病理学改变,采用二喹啉甲酸(BCA)法检测小鼠肺泡灌洗液中总蛋白含量,并计算小鼠肺湿/干质量比值.②体外实验:将肺泡巨噬细胞系(MH-S)随机分为空白对照组(用含10%血清的RPMI-1640培养基进行培养)、脓毒症模型组(加入LPS 10 mg/kg)、血必净预处理组(于制模前用血必净50 mL/L预处理1h).细胞刺激6h后,采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β的含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18的mRNA表达水平.用LPS刺激细胞并在最后2h,用尼日利亚菌素共刺激细胞,激活细胞的经典焦亡途径.在LPS刺激前用血必净注射液预处理细胞.同时,为了激活非经典的焦亡途径,用LPS和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)共刺激细胞,并在刺激前用血必净注射液预处理细胞.采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组细胞裂解液中焦亡蛋白Gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N端片段、IL-1β剪切体(cleaved IL-1β)的蛋白表达水平.结果 ①体内实验:与正常对照组比较,给予LPS处理后生存小鼠明显减少(只:4 比 10),肺组织病理损伤明显,肺泡灌洗液总蛋白含量、肺湿/干质量比值、血浆炎症因子水平均明显升高[肺泡灌洗液总蛋白含量(mg/L):1063.75±162.85 比 399.00±62.14,肺湿/干质量比值:5.06±0.42 比3.13±0.79,IL-6(ng/L):4294.80±614.03 比 31.20±5.95,IL-1β(ng/L):143.33±92.50 比 4.06±0.74,TNF-α(ng/L):521.60±211.53 比 145.21±44.32,均P＜0.05];而用血必净预处理后生存小鼠明显增加(只:8 比 4),肺组织病理损伤明显减轻,肺泡灌洗液总蛋白含量、肺湿/干质量比值、血浆炎症因子水平均明显降低[肺泡灌洗液总蛋白含量(mg/L):550.00±99.62 比 1063.75±162.85,肺湿/干质量比值:3.50±0.36 比 5.06±0.42,IL-6(ng/L):1515.10±618.84 比 4294.80±614.03,IL-1β(ng/L):33.66±12.51 比 143.33±92.50,TNF-α(ng/L):194.61±71.42比521.60±211.53,均P＜0.05].②体外实验:用LPS刺激后细胞培养上清液中炎症因子含量和mRNA表达水平均明显增加[IL-6(ng/L):4837.33±1005.23 比23.43±11.93,IL-1β(ng/L):215.29±87.36 比21.52±29.20,TNF-α(ng/L):435.85±67.41 比 175.48±40.25,IL-6 mRNA(2-ΔΔCt):274.07±82.12比1.21±0.50,TNF-α mRNA(2-ΔΔCt):3.42±0.68 比 0.82±0.16,IL-1β mRNA(2-ΔΔCt):462.40±75.20 比 1.42±0.39,IL-18 mRNA(2-ΔΔCt):1.25±0.06 比 0.53±0.40,均P＜0.05],用LPS和HMGB1/尼日利亚菌素刺激后,GSDMD-N和cleaved IL-1β蛋白表达均上调;而采用血必净预处理后,细胞培养上清液中炎症因子含量和mRNA表达水平显著下降[IL-6(ng/L):1551.62±234.13 比 4837.33±1005.23,IL-1β(ng/L):39.37±20.35 比 215.29±87.36,TNF-α(ng/L):121.36±25.92 比 435.85±67.41,IL-6 mRNA(2-ΔΔCt):59.92±21.60 比 274.07±82.12,TNF-α mRNA(2-ΔΔCt):1.01±0.15 比 3.42±0.68,IL-1β mRNA(2-ΔΔCt):56.69±8.34 比 462.40±75.20,IL-18 mRNA(2-ΔΔCt):0.73±0.16比1.25±0.06,均P＜0.05],GSDMD-N、cleaved IL-1β蛋白表达均被明显抑制.结论 血必净通过抑制肺泡巨噬细胞的焦亡,降低细胞炎症反应水平,改善脓毒症小鼠急性肺损伤程度.

关键词：脓毒症、急性肺损伤、肺泡巨噬细胞、血必净、焦亡

所属期刊栏目：30

分类号：R734.2;R363;R563

在线出版日期：2023-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：418-423