717解毒合剂对蝮蛇毒所致局部组织损伤的保护作用与机制研究

摘要：

目的 研究717解毒合剂对蝮蛇咬伤动物模型局部组织损伤的保护作用及其可能的机制.方法 将59只健康SD大鼠按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组(n=12)、蝮蛇毒模型组(n=9)、抗蝮蛇毒血清组(n=11)和717解毒合剂25、60、150?mg/kg组(均n=9).采用皮下注射50?g/L蛇毒溶液建立蝮蛇毒模型,NS对照组予以等量NS.制模成功后2?h,抗蝮蛇毒血清组于尾静脉注射抗蝮蛇毒血清(每只0.6?mL),717解毒合剂组分别予以25、60、150?mg/kg?717解毒合剂生药灌胃(每日1次,连用6?d),NS对照组和蝮蛇毒模型组予以等量NS灌胃,6?d后取各组大鼠血清及大腿腓肠肌.另取15只健康KM小鼠随机分为NS对照组、蝮蛇毒模型组和717解毒合剂10?mg/kg组,每组5只,制模方法同SD大鼠,制模后717解毒合剂组以10?mg/kg?717解毒合剂生药灌胃(每日1次,连用3?d),3?d后处死.观察各组大鼠局部组织损伤情况以及小鼠腹部皮下出血情况,光镜下观察各组大鼠腓肠肌的病理学改变,采用放射免疫法(RIA)测定血清细胞外基质透明质酸(HA)、?Ⅳ型胶原(ColⅣ)及层黏连蛋白(LN)水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,采用蛋白质免疫印迹试验(Western?blotting)检测各组腓肠肌诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达情况.结果 蝮蛇毒制模后大鼠创面均出现典型中毒现象,且随时间延长逐渐加重,72?h后717解毒合剂60?mg/kg组大鼠的局部肿胀程度明显轻于同期蝮蛇毒模型组.制模4?h后KM小鼠腹部皮下可见弥漫性出血,为典型局部中毒,72?h后717解毒合剂10?mg/kg组小鼠的恢复情况明显优于同期蝮蛇毒模型组.蝮蛇毒模型组大鼠血清HA、ColⅣ和LN水平均明显高于NS对照组,而抗蝮蛇毒血清组及717解毒合剂60?mg/kg和150?mg/kg组上述指标水平则较蝮蛇毒模型组明显改善,其中HA和ColⅣ水平以717解毒合剂150?mg/kg组改善最为明显〔HA(μg/L):112.83±19.89比162.52±16.29,ColⅣ(μg/L):120.04±21.44比158.77±36.64,均P<0.01〕,LN水平以60?mg/kg组改善最为明显(μg/L:69.09±15.22比96.66±15.72,P<0.01).蝮蛇毒模型组大鼠血清IL-2、TNF-α、NF-κB和TGF-β1水平均明显高于NS对照组,而抗蝮蛇毒血清组及717解毒合剂60?mg/kg和150?mg/kg组上述指标水平则较蝮蛇毒模型组明显改善,其中NF-κB水平以717解毒合剂60?mg/kg组改善最为明显(ng/L:14.46±4.42比20.81±2.59,P<0.01).苏木素-伊红(HE)染色结果显示,NS对照组大鼠腓肠肌结构正常;蝮蛇毒模型组大鼠腓肠肌严重弥漫性肌纤维损伤与炎性浸润,可见大量细胞坏死;抗蝮蛇毒血清组大鼠腓肠肌损伤减轻,但炎性浸润显著;717解毒合剂组大鼠炎性细胞浸润减轻,正常细胞数增多.蝮蛇毒模型组大鼠腓肠肌iNOS和COX-2蛋白表达均较NS对照组明显增强,717解毒合剂60?mg/kg和150?mg/kg组的iNOS表达较蝮蛇毒模型组明显减弱,抗蝮蛇毒血清组及717解毒合剂各剂量组COX-2表达均较蝮蛇毒模型组明显减弱,其中以717解毒合剂150?mg/kg组变化最明显(iNOS/β-tubulin:0.71±0.13比0.95±0.14,?COX-2/β-tubulin:0.33±0.10比0.67±0.11,均P<0.01).结论 717解毒合剂能显著改善小鼠腹部皮下出血症状,促进新生肉芽组织生长,加快创面愈合,减轻腓肠肌病理损害,同时能明显改善大鼠局部组织结构,降低血清中细胞外基质成分含量与炎性因子水平,抑制腓肠肌iNOS和COX-2蛋白表达.

关键词：717解毒合剂、蝮蛇咬伤、局部组织损伤、细胞外基质、抗炎、抗氧化

所属期刊栏目：28

分类号：R646;R734.2;R457.2

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;江西省自然科学基金;江西省教育厅科技项目

在线出版日期：2021-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：203-208