双黄连对乌头碱所致PC12细胞损伤的干预作用

摘要：

目的：观察乌头碱对PC12细胞释放谷氨酸（Glu）及γ-氨基丁酸（GABA）的影响，并探讨双黄连的干预作用。方法采用细胞增殖试剂（CCK-8）检测乌头碱对PC12细胞的毒性，建立乌头碱损伤模型，将处于对数生长期的PC12细胞按随机数字表法分为空白对照组（加入含0.1%二甲亚砜的完全培养基）、双黄连对照组（加入50μg/mL的双黄连）、黄芩苷对照组（加入20μmol/L的黄芩苷）、乌头碱中毒组（加入100μmol/L的乌头碱）、双黄连干预组（加入100μmol/L的乌头碱和50μg/mL的双黄连）、黄芩苷干预组（加入100μmol/L的乌头碱和20μmol/L的黄芩苷），各组均培养PC12细胞24 h。采用CCK-8法检测双黄连及黄芩苷干预前后PC12细胞吸光度（A）值的变化；用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡情况；采用化学比色法及酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中Glu、GABA含量的变化。结果与空白对照组比较，100μmol/L乌头碱处理PC12细胞24 h后细胞活性明显降低（A值：1.003±0.042比1.685±0.030，P＜0.05），所以本实验将100μmol/L乌头碱与PC12细胞孵育24 h作为后续实验的干预浓度。空白对照组的正常PC12细胞为95.89%；而乌头碱中毒组损伤的PC12细胞达到64.27%，其中早期凋亡率达45.46%；双黄连干预组和黄芩苷干预组早期细胞凋亡率分别降低至33.24%和28.22%。与空白对照比较，双黄连和黄芩苷单独作用对照组细胞活性及PC12细胞释放的Glu和GABA含量差异均无统计学意义（均P＞0.05）；乌头碱中毒组细胞活性明显降低（A值：1.056±0.039比1.722±0.083），PC12细胞释放的Glu和GABA含量显著升高〔Glu（μmol/L）：5.295±0.137比3.433±0.138，GABA（μmol/L）：0.769±0.020比0.528±0.012，均P＜0.05〕；与乌头碱中毒组比较，双黄连干预组和黄芩苷干预组PC12细胞活性明显增加（1.202±0.059和1.180±0.032），Glu含量显著减少（4.055±0.086和3.984±0.057），GABA含量显著增加（0.809±0.016和0.930±0.021），差异均有统计学意义（均P＜0.05），且双黄连干预组细胞活性增加程度较黄芩苷干预组更显著；双黄连干预组与黄芩苷干预组Glu和GABA含量比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论 Glu和GABA的改变可能是乌头碱所致神经毒性机制之一；双黄连可能通过其主要成分黄芩苷降低Glu含量、升高GABA含量，从而拮抗乌头碱的神经毒性。

关键词：乌头碱、神经损伤、黄芩苷、神经递质

分类号：R73;R45

资助基金：浙江省中医药科技计划项目2011ZA074；浙江省中医药重点学科计划2012-XK-A28；浙江省“十二五”重点学科建设项目2012-207；浙江省医学创新学科建设项目11-CX26

在线出版日期：2014-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：408-411