两种胶浓度PCR-DGGE方法对不同处理羊粪低温沼气发酵优势细菌结构多样性的分析

摘要：

利用PCR-DGGE方法分析不同菌剂处理对羊粪沼气发酵微生物种群多样性的影响,了解低温条件下(15℃)羊粪沼气发酵过程中优势细菌群落结构多样性变化规律,从而为北方地区冬季低温沼气发酵促进菌剂的筛选奠定理论基础.通过对不同发酵处理的羊粪沼气反应器中取样,采用溶菌酶法,分别进行沼液中总DNA的提取,总DNA经纯化后采用引物341F-GC和518R进行细菌16S rDNA基因V3区PCR扩增,扩增产物进行两种胶浓度变性梯度凝胶电泳(DGGE)分离并回收优势条带和变化明显的条带进行扩增、测序及系统进化树的绘制,分析其细菌结构多样性.序列比对的结果表明,羊粪沼气反应器中的优势细菌菌群为:回收的44条带中拟杆菌门(Bacteroidetes)占32％,变形菌门(Proteobacteria)占30％,厚壁菌门(Firmicutes)占36％.其中,在15℃条件下,反应器中细菌优势基因片段更为丰富均匀,存在相对稳定的优势种群,且各处理的优势菌的丰度比对照组中相应菌的丰度更强,存在差异条带,细菌种群变化明显,优势种群亦有所不同,主要有Clostridiumsp.,Proteiniphilum sp.,Bacteroidales bacteriu,Pseudomonas sp,Advenella sp.等,其中低温下菌剂处理的以梭菌属菌(Clostidium)表现有较高的丰度;而在30℃条件下,主要有Bacteroidales bacterium,Hydrogenophaga sp.,Pseudomonas sp,Clostridiales bacterium等,其中以噬氢菌属(Hydrogenophaga)Hydrogenophaga sp.表现有较高的丰度,条带多样性数量比15℃的要少,添加菌剂处理对细菌种群变化影响不明显.

关键词：低温沼气、发酵、微生物种群、多样性、PCR-DGGE

所属期刊栏目：32

分类号：X713;S216.4(农业废物处理与综合利用)

资助基金：国家自然科学基金项目31260016;新疆维吾尔自治区重大专项201130104;新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目201010104

在线出版日期：2015-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：9-15